Smac基因过表达联合顺铂/氯化镉对SMMC-7721细胞凋亡及其相关机制的研究

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Smac是继细胞色素c(cytochrome c,Cyt c)后发现的又一种线粒体促凋亡蛋白,其过表达能增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,促进肿瘤细胞凋亡。本研究主要探讨Smac基因过表达联合顺铂/氯化镉对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响及其相关机制。本实验构建了携带Smac基因的重组质粒pcDNA3.1+-FL hSmac,转染SMMC-7721细胞后可有效表达Smac mRNA和蛋白;建立了稳定过表达Smac基因的细胞株SMMC-7721/Smac。以SMMC-7721细胞为模型,采用MTT法检测瞬时Smac基因过表达联合顺铂/氯化镉对细胞增殖的抑制作用,AO/EB法和AnnexinⅤ/PI双荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡,采用Western blot法检测细胞中caspase-3、-9和Cyt c蛋白表达的变化,并以SMMC-7721/Smac细胞为模型,采用Western blot法和免疫细胞化学法检测联合顺铂/氯化镉后细胞中这三种蛋白表达的变化。研究结果表明,瞬时Smac基因过表达可抑制细胞增殖,诱发细胞凋亡,且可明显增强顺铂/氯化镉对肝癌细胞的增殖抑制和促凋亡作用,加速细胞由早期凋亡向晚期凋亡的进程。瞬时Smac基因过表达可增加细胞中caspase-3、-9和Cyt c的表达,联合顺铂/氯化镉作用后可更进一步增加这三者的表达。与SMMC-7721细胞相比,SMMC-7721/Smac细胞生长缓慢,caspase-3、-9和Cyt c蛋白表达水平较高,联合顺铂/氯化镉作用后,这三种蛋白的表达均明显增加。本研究为以Smac为基础的肿瘤基因治疗,肝癌临床治疗效果的改善,以及氯化镉作为抗肝癌药物的开发提供实验依据。
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