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目的：钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白2(Sodium-dependent neutral amino acid transporter2,SNAT2)是SLC38蛋白家族中的一员,跨膜转运小的中性氨基酸,广泛表达于哺乳动物组织中。SNAT2的功能紊乱可以导致许多神经性疾病,如阿尔茨海默症、帕金森症等。在大脑中,SNAT2主要转运谷氨酰胺进入细胞,参与谷氨酸-谷氨酰胺的循环,因此具有重要的生理功能。本研究通过克隆编码SNAT2蛋白氨基端75个氨基酸基因,构建pET28-SNAT2-75aa原核表达载体,诱导融合蛋白表达,并用纯化的目的蛋白免疫大白兔获得SNAT2多克隆抗体。抗体经亲和纯化,得到特异性强、检测效率高的SNAT2多抗,为SNAT2蛋白功能及其结构的深入研究奠定了生化基础。方法：本研究采用PCR方法扩增得到SNAT2氨基端75个氨基酸的编码序列,构建重组质粒pET28a-SNAT2-75aa,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达重组蛋白。利用组氨酸标签蛋白经镍柱亲和纯化后得到了纯度在95%以上的SNAT2氨基端蛋白SNAT2-75aa,将其作为免疫原免疫新西兰大白兔,从而获得SNAT2多克隆抗体。采用巯丙基琼脂糖凝胶6B (Thiopropyl sepharose)固定抗原亲和纯化法进一步对该抗体进行纯化,蛋白免疫印迹确定该抗体对SNAT2具有高度的特异性。结果：纯化前的SNAT2抗体,经间接ELISA检测其效价为1：512000,但Western blot检测结果并不理想。采用巯丙基琼脂糖凝胶6B (Thiopropyl sepharose)固定抗原亲和纯化法进一步对该抗体进行纯化,用Western blot的方法检测亲和纯化后的SNAT2多克隆抗体,对融合蛋白SANT2-75aa和哺乳动物细胞中表达的全长SNAT2蛋白的特异性,结果显示纯化后的SNAT2抗体对SNAT2蛋白氨基端75个氨基酸及SNAT2蛋白均具有高度特异性,且检测效价至少提高了十倍。结论：在原核表达系统中成功表达了可溶性的SNAT2蛋白氨基端的75个氨基酸,经镍柱纯化得到纯度>95%的融合蛋白,将其作为免疫原免疫大白兔获得了SNAT2多克隆抗体,抗体经进一步的亲和纯化检测效率提高十倍,可有效检测HEK293T细胞中表达的SNAT2蛋白,为SNAT2蛋白的进一步研究提供了高效的工具。