为了实现壳聚糖酶产业化的目的，本研究希望构建一种稳定、高效表达的工程菌。 本研究在比较传统提取总RNA方法的基础上针对烟曲霉 (Aspergillusfumigatus)的一些特点获得一种改进的提取总RNA的新方法，并利用这种方法从已知的产酶菌中提取了高质量的总RNA。根据酶蛋白N端测序的结果结合Getaebank中发布的壳聚糖酶基因序列设计出一对引物T<,3>、T<,4>，以提得的烟曲霉总RNA为模板利用RT-PCR的手段成功调取壳聚糖酶的基因。为了使以后的纯化简单点，本项研究采用了毕赤酵母分泌表达系统作为酶的表达生产工具。用限制性内切酶Not Ⅰ及Avr Ⅱ双酶切目的基因及空载体pPIC9K，用连接酶将两者连接构建重组载体。将构建的载体pPIC9K-Csn克隆进大肠杆菌DH5 α进行阳性克隆子的挑选和测序。将测序正确的重组载体用sal Ⅰ线性化，经去磷酸化后电转化入宿主菌GS115，通过重组，带有目的基因的载体被整合到宿主菌的染色体。然后用MD平板及酵落PCR的方法筛选阳性克隆子。将所得的阳性克隆子用甲醇诱导，然后对发酵液进行SDS-PAGE电泳检测及酶活性鉴定。经鉴定构建的表达系统能够表达壳聚糖酶且有活性。 本次研究通过构建相关表达载体及工程菌株，实现壳聚糖酶在毕赤酵母中的分泌表达，并对表达的产物进行了相关的生物活性鉴定。为下一步的研究奠定基础。