【目的】
　　1、建立大鼠脑死亡模型，探讨脑死亡状态下Klotho水平变化与肾损伤的相关关系。
　　2、探索外源性Klotho蛋白补充对大鼠脑死亡后肾损伤的保护作用。
　　3、探索重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus，rAAV)介导Klotho基因转染对大鼠脑死亡后肾损伤的保护作用。
　　【方法】
　　第一部分：10-14周龄雄性SPF级SD大鼠，体重为250～300g，随机分为空白对照组、假手术组和脑死亡组，并建立大鼠脑死亡模型，呼吸机辅助通气维持脑死亡状态，于脑死亡诱导成功后4h处死大鼠并收集标本。第二部分：10-14周龄雄性SPF级SD大鼠，体重为250～300g，随机分为空白对照组、假手术组、脑死亡组和Klotho腹腔注射组，并建立大鼠脑死亡模型维持脑死亡状态4h，其中，Klotho腹腔注射组在脑死亡诱导成功后10min腹腔注射Klotho蛋白(剂量为0.01mg/kg)。第三部分：10-14周龄雄性SPF级SD大鼠，体重为250～300g，随机分为空白对照组、空载体组和载体组，其中，载体组大鼠经左肾动脉注射携带Klotho基因的重组腺相关病毒(rAAV-KL)．空载体组大鼠注射空载重组腺相关病毒(rAAV-null)，空白对照组大鼠不行转染手术。转染2周后，载体组大鼠行缓慢颅内加压建立脑死亡模型，维持脑死亡状态4h，同时设立相应的假手术组。空白对照组和空载体组只行麻醉，不做其他处理。标本收集：抽血检测Cr和BUN水平，ELISA法检测血清Klotho浓度；取各组左肾皮质，苏木精一伊红(Hematoxylin-eosin，HE)染色观察肾组织病理学改变，免疫组化(Immunohistochemistry，IHC)定性观察肾脏Klotho蛋白表达，肾脏冰冻切片检测荧光蛋白表达。
　　【结果】
　　第一部分：与空白对照组和假手术组相比，脑死亡组大鼠Cr和BUN水平明显升高，肾脏组织结构出现严重损害，表现为：大量肾小管上皮细胞坏死、脱落，近端小管刷状缘膜缺失，肾小管管型形成，肾小球萎缩。同时，脑死亡组大鼠血清和肾脏Klotho水平出现显著下调。
　　第二部分：与脑死亡相比，Klotho腹腔注射组大鼠血清Klotho水平丌高，同时伴有血清Cr和BUN水平下降，但病理检查仍可见不同程度肾脏组织结构损害，如肾小管上皮细胞坏死、脱落，肾小管管型形成以及肾小球萎缩，肾组织Klotho表达并未见明显增加。
　　第三部分：与脑死亡相比，载体脑死亡组人鼠血清和肾脏Klotho水平明显上调，同时伴有血清Cr和BUN水平的显著下降。病理检查显示，载体脑死亡组肾组织结构损害程度较脑死亡组显著减轻。
　　【结论】
　　1、大鼠脑死亡状态可造成肾脏损伤，伴有血清和肾脏Klotho水平下降；大鼠脑死亡相关肾损伤与Klotho水平的下调关系密切。
　　2、外源性Klotho蛋白补充对脑死亡相关肾损伤的保护作用有限。
　　3、应用腺相关病毒过表达Klotho对脑死亡状态下大鼠肾脏具有保护作用。