牛病毒性腹泻/黏膜病的血清学调查及病原分离

来源 :新疆农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuhua1435
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随机采取新疆不同地区的450份牛血清和对应的肛拭子样品,采用双抗原夹心酶联免疫法(ELISA)和双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)对血清样品进行了BVDV的抗体和抗原检测。结果显示,163份血清样品为BVDV抗体阳性,阳性率为36.2%;209份血清样品为BVDV抗原阳性,阳性率为46.4%。将检测为BVDV抗体和抗原都为阳性的对应的肛拭子样品,在4℃12000rpm离心10min后,上清经过过滤除菌,接种于长满单层的牛肾细胞(MDBK)上,盲传5-7代后,将该细胞在-20℃冻存,再在室温下融化,如此反复冻融3次后,将收集的细胞悬液分装于-80℃保存备用。结果显示,盲传细胞出现两种情况:一份出现细胞病变,其余三份没有出现细胞病变。根据BVDV核酸特征,采用RT-PCR方法来鉴定上述接毒细胞中是否有BVDV感染:提取细胞RNA,再反转录为cDNA,根据BVDV5’-UTR区序列的保守性及特异性,参考相关文献中的引物,进行PCR,预期扩增244bp的目的条带。凝胶电泳后的结果显示在244bp处没有条带。本研究对新疆部分地区的BVDV血清学流行情况做了基本的调查,为进一步了解该病在新疆的感染情况以及对其防控提供了实验数据。
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