不同类型牙周炎患者外周血中辅助性T细胞亚群及龈沟液内IL-17的检测

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目的:牙周炎是发生在牙周组织的感染性疾病。牙周致病菌和宿主免疫反应共同作用影响牙周炎的发展。辅助性T细胞(help T cell, Th)具有辅助其他免疫细胞分化和调节免疫应答的作用。因此本研究以牙周炎患者为研究对象,用流式细胞术检测其外周血中辅助性T细胞亚群Th1/Th2/Th17的水平,并用酶联免疫法(ELISA)检测龈沟液(gingival crevicular fluid, GCF)中白细胞介素-17(IL-17)的水平,以便为牙周炎的发病过程提供免疫学的依据,进一步从免疫平衡角度阐述牙周炎发病机制并为其治疗提供理论依据。分析IL-17与牙周炎各项临床指标间的关系,探讨IL-17在牙周炎发病机制、病情进展等方面所起的作用。方法:选择河北省口腔医院口腔内科门诊检查患者,成人(慢性牙周炎组18-50岁,侵袭性牙周炎组18-35岁)。根据口腔情况分为3组:慢性牙周炎患者(CP)11例,侵袭性牙周炎患者(AgP)8例和健康对照组10例,检查全口余留牙齿,详细记录每颗牙的牙周情况及除第三磨牙外的所有缺牙数。牙周检查包括:菌斑指数(PLI)、探诊深度(PD)、附着丧失(AL)、出血指数(BI)等,同时拍摄常规X线曲面断层片辅助诊断。1、检测外周血中Th1/Th2/Th17水平:清晨空腹采集受检者外周静脉血2ml肝素抗凝,检测白细胞分类计数(中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)。每例样本设检测管和对照管,各取新鲜抗凝外周血100μl,各检测管分别加入相应检测抗体,对照管加入同型对照抗体,流式细胞仪上机检测Th1/Th2/Th17水平。2、检测龈沟液内IL-17的水平:所有受检者均选取六颗指数牙(16,11,26,36,31,46),取6颗牙位各研究指标的均值来代表该患者的牙周情况,从而保证实验设计的科学性。用滤纸条法收集所有受试牙的龈沟液,采用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测龈沟液中IL-17的浓度,并与各临床指标作相关性检验。结果:1、各试验组血常规检测均在正常范围内。2、各试验组外周血中各项免疫指标的变化:正常对照组外周血中Th1/Th2/Th17细胞所占比例分别为0.48±0.26%、1.49±0.70%、0.43±0.32%。慢性牙周炎患者外周血中Th1/Th2/Th17细胞所占比例分别为2.46±0.49%、0.62±0.35%、1.64±1.15%。与健康对照组相比,Th1明显增高(P<0.01);Th2明显降低(P<0.01);Th17明显增高(P<0.01)。侵袭性牙周炎患者外周血中Th1/Th2/Th17细胞所占比例分别为2.37±1.07%、0.57±0.15%、2.12±1.09%。与健康对照组相比,Th1明显增高(P<0.01);Th2明显降低(P<0.01);Th17明显增高(P<0.01)。但与慢性牙周炎组比较Th1/Th2/Th17细胞所占比例无明显差异(P>0.05)。3、各试验组龈沟液内IL-17的变化:正常对照组,慢性牙周炎组和侵袭性牙周炎组龈沟液内IL-17浓度分别为337.57±42.77pg/μl、428.68±54.92pg/μl、460.9±41.95pg/μl。慢性牙周炎患者龈沟液内IL-17浓度高于正常对照组(P<0.01),且IL-17浓度与PD成正相关关系(r=0.924,P<0.01);与AL成正相关(r=0.930,P<0.01)。侵袭性牙周炎患者龈沟液中IL-17浓度高于正常对照组(P<0.01),且与PD成正相关关系(r=0.857,P<0.01);IL-17与AL无明显相关性(P>0.05)。侵袭性牙周炎组与慢性牙周炎组相比,IL-17浓度无明显差异(P>0.05)。结论:1、慢性牙周炎和侵袭性牙周炎患者与牙周健康者比较Th2淋巴细胞降低,Th1、Th17淋巴细胞增多,机体免疫功能存在不同程度的降低。2、牙周炎患者龈沟液中IL-17的浓度高于正常对照组,且随着牙周探诊深度和附着丧失程度的加重IL-17浓度上升。IL-17的浓度与牙周炎发生发展密切相关,可以反映牙周组织破坏的程度。3、慢性牙周炎和侵袭性牙周炎患者外周血中Th1/Th2/Th17细胞所占比例及龈沟液内IL-17浓度均无明显差别,机体免疫功能状态相似。
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