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目的:建立雾霾环境下流感病毒(IV)感染的BALB/c小鼠模型;从组织学、分子生物学等水平研究甘露消毒丹(GXM)对雾霾环境下IV感染小鼠TLR3/TRIF信号通路的调控机制,探讨其抗IV感染的作用靶点,为临床治疗提供实验依据。材料与方法:将72只SPF级BABL/c小鼠,4～6周龄,随机分成正常组、模型组、甘露消毒丹组、磷酸奥司他韦组,每组18只。除正常组外,其余各组于第2天开始造模,首先将各组放入人工气候培养箱中2个小时,取出后用PM2.5混悬液进行气管滴注,隔日1次,共3次。造模第7天,在乙醚轻度麻醉下,模型组、甘露消毒丹组、磷酸奥司他韦组于鼻腔接种甲型流感病毒鼠肺适应株A/FM1/47(H1N1)0.1 m L/只。造模成功后,正常组、模型组给予生理盐水灌胃,甘露消毒丹组及磷酸奥司他韦组分别给予对应药物灌胃,每日1次,连续10天。各组小鼠分别于造模后第3、7、10天取材。光镜下观察小鼠肺组织病理切片,对小鼠肺组织病理炎症程度进行评分;并计算小鼠肺指数;采用q PCR法对小鼠肺组织TLR3、TRIF的基因含量进行测定;ELISA法检测小鼠血清中IFN-β、IL-6的表达水平;Western blot法检测小鼠肺组织中NF-κB、IRF3蛋白的表达。结果:1.PM2.5与IV联合感染后,正常组小鼠肺组织病理切片基本正常;模型组小鼠肺组织出现炎性细胞浸润、肺泡结构破坏等改变;甘露消毒丹组小鼠肺泡内可见少量炎性细胞,与模型组相比,支气管上皮粘膜水肿明显减轻;磷酸奥司他韦组小鼠肺泡内可见少量炎性细胞,与模型组相比,炎性细胞数量明显减少。2.PM2.5与IV联合感染后,各时间点小鼠肺指数、病理评分均升高(P<0.05),于第7天达到峰值。与模型组比较,第3天甘露消毒丹组、磷酸奥司他韦组小鼠肺指数、病理评分有所降低,差异有统计学意义(P<0.05);第7天、第10天甘露消毒丹组、磷酸奥司他韦组小鼠肺指数、病理评分继续降低,差异有统计学意义(P<0.05);与甘露消毒丹组比较,第3天磷酸奥司他韦组小鼠肺指数、病理评分差异有统计学意义(P<0.05);第7天、第10天两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。3.PM2.5与IV联合感染后,各时间点小鼠TLR3表达升高,于造模后第7天达峰值,后逐渐下降;各时间点与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后TLR3表达降低,第3天甘露消毒丹组效果不明显(P>0.05),磷酸奥司他韦组有所降低(P<0.05);第7天甘露消毒丹组开始起效,TLR3表达降低(P<0.05),磷酸奥司他韦组持续降低(P<0.05);第10天甘露消毒丹组、磷酸奥司他韦组TLR2表达均降低,差异显著(P<0.05);与甘露消毒丹组比较,第3天磷酸奥司他韦组差异显著(P<0.05);第7天、第10天,两组间比较无显著差异(P>0.05)。4.PM2.5与IV联合感染后,各时间点小鼠TRIF含量升高,于造模后第7天达峰值,后逐渐下降;各时间点与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后TRIF含量降低,第3天甘露消毒丹组效果不明显(P>0.05),磷酸奥司他韦组有所降低(P<0.05);第7天甘露消毒丹组开始起效,TRIF含量降低(P<0.05),磷酸奥司他韦组持续降低(P<0.05);第10天甘露消毒丹组、磷酸奥司他韦组TRIF含量均降低,差异显著(P<0.05);与甘露消毒丹组比较,第3天磷酸奥司他韦组差异显著(P<0.05);第7天、第10天,两组间比较无显著差异(P>0.05)。5.PM2.5与IV联合感染后,各时间点小鼠NF-κB蛋白表达升高,于造模后第3天达峰值,后逐渐下降;各时间点与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后NF-κB蛋白表达降低,第3天甘露消毒丹组效果不明显(P>0.05),磷酸奥司他韦组有所降低(P<0.05);第7天甘露消毒丹组开始起效,NF-κB蛋白表达降低(P<0.05),磷酸奥司他韦组持续降低(P<0.05);第10天甘露消毒丹组、磷酸奥司他韦组NF-κB蛋白表达均降低,差异显著(P<0.05);与甘露消毒丹组比较,第3天磷酸奥司他韦组差异显著(P<0.05);第7天、第10天,两组间比较无显著差异(P>0.05)。6.PM2.5与IV联合感染后,各时间点小鼠IRF3蛋白表达升高,于造模后第3天达峰值,后逐渐下降;各时间点与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后IRF3蛋白表达降低,第3天甘露消毒丹组效果不明显(P>0.05),磷酸奥司他韦组有所降低(P<0.05);第7天甘露消毒丹组开始起效,IRF3蛋白表达降低(P<0.05),磷酸奥司他韦组持续降低(P<0.05);第10天甘露消毒丹组、磷酸奥司他韦组IRF3蛋白表达均降低,差异显著(P<0.05);与甘露消毒丹组比较,第3天磷酸奥司他韦组差异显著(P<0.05);第7天、第10天,两组间比较无显著差异(P>0.05)。7.PM2.5与IV联合感染后,各时间点小鼠IL-6含量升高,于造模后第3天达峰值,后逐渐下降;各时间点与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后IL-6含量降低,第3天甘露消毒丹组效果不明显(P>0.05),磷酸奥司他韦组有所降低(P<0.05);第7天甘露消毒丹组开始起效,IL-6含量降低(P<0.05),磷酸奥司他韦组持续降低(P<0.05);第10天甘露消毒丹组、磷酸奥司他韦组IL-6含量均降低,差异显著(P<0.05);与甘露消毒丹组比较,第3天磷酸奥司他韦组差异显著(P<0.05);第7天、第10天,两组间比较无显著差异(P>0.05)。8.PM2.5与IV联合感染后,各时间点小鼠IFN-β含量出现一过性升高,于造模后第7天达峰值,后逐渐下降,但仍高于正常组水平;各时间点与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后IFN-β含量升高,各时间点甘露消毒丹组、磷酸奥司他韦组均升高,差异显著(P<0.05);与甘露消毒丹组比较,第3天磷酸奥司他韦组差异显著(P<0.05);第7天、第10天,两组间比较无显著差异(P>0.05)。结论:1.本实验采用气管滴注联合IV滴鼻法建立小鼠致炎模型成功,并证明此方法简单、可靠,可广泛用于小鼠呼吸系统重复滴注,有利于进一步研究肺部疾病及其他致炎机制。2.雾霾环境下IV感染小鼠肺组织TLR3表达与TRIF、NF-κB表达趋势基本一致,推测IV感染后可能通过依赖TLR3/TRIF信号通路,参与炎症反应。3.甘露消毒丹可以控制雾霾环境下IV感染后肺部炎症;能够下调雾霾环境下IV感染小鼠肺组织中TLR3、TRIF、NF-κB及IRF3表达水平,并能够下调血清中IL-6的表达,上调IFN-β的表达;且对雾霾环境下IV感染小鼠的免疫功能具有调节作用。4.经研究发现甘露消毒丹抗雾霾环境下IV感染机制可能与阻断TLR3/TRIF信号通路传导,减少促炎因子的释放有关。