牛泡沫病毒正调控蛋白BTas调节细胞NF-κB信号通路研究

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牛泡沫病毒(Bovine Foamy Virus)属反转录病毒科泡沫病毒亚科泡沫病毒属,在体外虽可使细胞发生强烈病变,在体内却不表现任何病症。该病毒基因组中存在两类启动子,其中LTR启动结构基因的表达,内部启动子IP启动病毒辅助蛋白的表达,基因转录需要这两个启动子的协同作用。反式激活因子BTas可上调两类启动子的活性。 本实验室前期研究表明,BTas通过与其在启动子上的应答元件相结合实现其对启动子的激活。同时我们也发现,当LTR上两个TRE区域同时缺失时,虽然BTas对其激活明显下降,但与对照组相比仍有激活作用。序列分析结果表明,残存序列中存在一个NF-kB因子的潜在结合位点,因此我们推测BTas可以通过NF-kB信号通路激活BFV LTR。 本文对BTas与NF-kB信号通路关系进行研究。发现BTas能够特异性激活只含有kB结合序列的报告基因,免疫荧光定位分析显示BTas能够导致p65-NF-kB因子的核转位,证明BTas激活了NF-kB信号通路。进一步对其机制进行探索,发现BTas可以诱导NF-kB抑制蛋白IkBa的磷酸化,该蛋白的磷酸化位点突变体以及IKK激酶突变体均能够有效的抑制BTas对kB报告基因的激活作用,表明BTas的激活作用需要IKK引发的磷酸化作用。利用IKK上游激酶的失活突变体,我们证明BTas对NF-kB的激活作用与TRAF6相关。此外,我们证明病毒感染也能激活只含有kB结合序列的报告基因。以上实验结果证明BTas确实可通过经典途径,活化IKK、促进IkBa的磷酸化,说明NF-kB信号通路可能在泡沫病毒与宿主的相互作用中扮演重要的角色。
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