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背景:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,乳腺癌属于乳腺腺上皮组织的异质性疾病,其发生与年龄、雌激素、家族史、基因易感性等因素有关。目前,研究发现众多基因突变和异常表达参与乳腺癌的发生与发展过程。因此,探讨与乳腺癌相关的基因表达,功能及其机制研究,将会进一步揭示乳腺癌的发病机制和为防治乳腺癌发生与发展提供新的靶点。MAP2K4是丝裂原活化蛋白激酶激活剂家族的成员之一,信号级联反应激活MAP2K4,随后MAP2K4磷酸化而激活下游的分子JNK和P38,从而调控细胞免疫、增殖等过程,但其在乳腺癌中的作用及分子机制尚无报道。本文将着重探讨MAP2K4与乳腺癌相关的基因表达,功能及其机制研究,将会进一步揭示乳腺癌的发病机制和为防治乳腺癌发生与发展提供新的靶点。研究内容和方法1、MAP2K4在乳腺癌中的功能研究(1)使用慢病毒载体在MCF-7、A231细胞株中稳定过表达MAP2K4,用实时荧光定量PCR检测其过表达倍数及用Western Blot检测其在蛋白水平表达量;(2)乳腺癌细胞稳定过表达MAP2K4后,利用MTT实验、流式细胞术、Edu实验以及裸鼠原位皮下成瘤实验检测MCF-7和A231细胞中增殖的变化;Transwell实验、Boyden实验检测MAP2K4对MCF-7和A231细胞迁移和侵袭的影响;(3)在过表达MAP2K4的细胞里瞬时转染siRNA干扰MAP2K4的表达进行回复实验。2、MAP2K4在乳腺癌中的分子机制过表达MAP2K4后,Western Blot检测乳腺癌细胞(MCF-7和A231细胞)的增殖、侵袭和转移相关信号蛋白的表达;同时,Western Blot检测PI3K/AKT信号通路有关蛋白的表达水平的变化。3、MAP2K4的相互作用蛋白(1)通过免疫沉淀法(CoIP)检测MAP2K4蛋白可能存在的相互作用蛋白;(2)通过免疫荧光显微共聚焦实验检测MAP2K4与Vimentin蛋白在细胞中的共定位。4、MAP2K4和ER的表达在浸润性乳腺癌组织中的临床意义(1)利用免疫组化的方法检测MAP2K4在乳腺癌中的表达情况;(2)统计学方法分析MAP2K4与乳腺癌患者临床参数之间的表达关系;(3)利用统计学方法对MAP2K4和ER表达情况进行相关性分析。结论1、MAP2K4可以促进乳腺癌MCF-7和A231细胞的生长及增殖能力。2、MAP2K4可以促进乳腺癌MCF-7和A231细胞的游走侵袭迁移能力。3、siRNA干扰沉默MAP2K4表达后进行回复性功能实验显示能逆转MAP2K4促进的乳腺癌细胞增殖和侵袭迁移能力。4、MAP2K4在乳腺癌中通过调节PI3K/AKT信号通路来促进制增殖和侵袭转移。5、对MAP2K4蛋白进行深入分析,检测MAP2K4可能作用的相互蛋白及其在细胞中的共定位。6、MAP2K4在浸润性乳腺癌组织中与ER有相关性且呈负相关关系。