论文部分内容阅读
目的: 近年来，恶性肿瘤发病率不断地增高，严重危害着人类健康。据统计，世界范围内最常见的恶性肿瘤，胃癌排名第4位[1]，手术、化疗及放疗三大常规治疗效果差，远期生存率低，因此，如何提高治疗效果，改善患者的生活质量，预防胃癌复发及转移是目前研究的热点之一。伴随着免疫学理论以及分子生物学的不断发展，人们对肿瘤与免疫系统之间的关系的深刻认识，肿瘤免疫治疗越来越引起人们的重视。其中过继性细胞免疫疗法(Adoptive cell immunotherapy，ACI)中的细胞毒T细胞(Cytotoxic T lymphocyte，CTL)因杀瘤谱广、杀瘤活性高、增殖能力强、特异性高等特点成为焦点。
本研究旨在探讨表达癌胚抗原的重组腺相关病毒(rAAV/CEA)转染DC生成的CTL对胃癌细胞株的杀伤作用，为肿瘤治疗提供新的技术方法。
方法:
1.取健康人外周血，Ficoll分离液分离淋巴细胞，将获得的贴壁细胞(DC)分为2组:第1组加入rAAV/CEA病毒液;第2组加PBS液。两组细胞均加入GM-CSF、rhIL-4、TNF-α诱导其生长、成熟。两组成熟DC按1∶20与效应T细胞混合培养，诱导生成CTL。
2.FAM检测CEA转染率、成熟DC表型、CTL亚群比例、CTL体外杀伤率。
3.应用SPSS17.0统计软件，对所取得的数据进行分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。
结果:
1.倒置显微镜观察，培养2-3d后贴壁细胞由圆形逐渐变为不规则形，体积逐渐变大;5d后，细胞体积变得更大，表面有大量长短不一，毛刺状突起，呈现典型的树突状细胞形态。
2.转染组DC高水平表达CD86和CD40(96.37±2.08％，89.53±1.79％);未转染组则为81.95±2.64％、67.96±2.88％，组间差异明显(P＜0.01）。
3.转染组CEA表达率95.25±2.41％，未转染组表达较低，两组差异有显著统计学意义(P＜0.05)。
4.DC与原始T细胞共培养，倒置显微镜下可见T细胞形成大小不等的集落。
5.转染组CTL表面标志CD8+T，CD8+/CD4+的表达比例分别为87.12±2.30％，14.87±2.48％;而对照组的表达比例分别为70.17±2.12％、9.82±1.99％。差异具有统计学意义(P＜0.05)。
6.转染组诱导CTL对BCG-803胃癌细胞株的杀伤率随着E/T比例(20∶1，40∶1，80∶1)的增加而逐渐增高，且杀伤率显著高于PBS组(P＜0.05)。
结论:
1.rAAV/CEA转染DC，获得成熟DC细胞，倒置显微镜观察与未转染组DC相比形态无明显差异。
2.rAAV/CEA转染的DC细胞，CEA阳性细胞率为95.25±2.41％，此结果说明CEA在DC前体细胞内表达良好。
3.rAAV/CEA-DC高表达CD86、CD40与未转染组DC有明显差异。
4.rAAV/CEA转染DC细胞诱导的CTL与未转染组相比，具有较高的CD8+T，CD8+/CD4+的表达比例，差异显著。
5.rAAV/CEA转染诱导的CTL具有较强的杀伤肿瘤细胞的能力，杀伤率随着E/T比例(20∶1，40∶1，80∶1)的增加而逐渐增高。