痛风是由于嘌呤和(或)尿酸的持续代谢障碍或排泄减少，尿酸盐结晶(monosodi—um urate，MSU)析出并沉积于组织、器官引起的一种疾病。痛风的发病机制尚未完全阐明，但国内外研究表明痛风出现的炎症发病机制与TLRS/MyD88信号转导通路密切相关。Toll受体（TLRs）是人体先天免疫系统的识别受体，可以识别病原相关分子模型（PAMPs)和损伤相关分子模型（DAMPs），主要表达于免疫细胞，包括单核细胞、DCs和粒细胞、巨噬细胞等。THP-1细胞是利用白血病患者血液中的单核细胞建立的细胞株，表达除TLR3以外的所有的TLRS受体，是体外研究人单核-巨噬细胞功能的良好替代细胞。尿酸钠（MSU）可以被TLR2、TLR4特异性识别并介导其信号转导而调控炎症反应。　　虎杖是临床常用药，药用价值高，其来源于蓼科属草本植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc)的干燥根茎和根，具有较为广泛的药理活性，性苦寒，主要用于关节痹痛、湿热黄疸等疾病。虎杖苷是虎杖发挥作用的主要成分。桂枝是樟科乔木植物肉桂的干燥嫩枝，归心、肺、膀胱经，具有发汗解表等功能，常用于风热感冒、血寒经闭、关节痹通等症状。桂枝的主要含有挥发性类物、香豆素类、甾体类及其他不同类别的化学成分，桂皮醛是桂枝挥发油类成分中作用效果最佳的化合物。研究发现桂枝及其提取物能桂皮醛等能够治疗多种急性、慢性的炎症反应，有良好的抗炎、抗菌作用。中药具有寒、热、温、凉四种不同的药性。相反药性配伍如寒热药性，寒温药性是中医药理论现代研究的难点和热点，是中药药性理论的核心。本课题组前期研究表明：乐行痛风克对临床急性痛风性关节炎病人有着显著改善作用，寒温药对虎杖-桂枝是乐行痛风克方中的核心药对，并且虎杖：桂枝为6:1为最佳配比。　　基于以上我们已有的研究成果，在本实验中，我们观察虎杖-桂枝药对干预急性痛风炎症大鼠的作用，分析虎杖-桂枝药对对TLRS/MyD88信号通路的影响。另外，本实验将以THP-1细胞炎症模型为对象，分析虎杖苷、桂皮醛对TLRS/MyD88信号通路的影响，深入探讨虎杖-桂枝治疗急性痛风性关节炎的作用机制，以进一步了解虎杖-桂枝治疗痛风的可能靶点。　　1虎杖-桂枝对MSU诱导的大鼠急性痛风炎症中TLRs/MyD88信号通路影响　　目的：　　研究虎杖-桂枝药对对大鼠急性痛风炎症TLRs/MyD88分子通路的影响，进而探讨其对痛风的治疗作用机制。　　方法：　　将雄性SD大鼠48只，随机分成6组，每组8只，分别是正常对照组、尿酸钠（MSU）模型组、阳性药秋水仙碱组（0.1g·kg-1）、虎杖-桂枝低、中、高剂量组(3.5g·kg-1，7g·kg-1，14g·kg-1。相当于人体临床剂量的1，2，4倍）。正常对照组和模型组大鼠灌以生理盐水，其他各给药组给予相应药物灌胃7天（每日1次）。第4天灌胃后1小时后模型组与各给药组大鼠右后踝关节注射尿酸钠（MSU）0.2 ml（25 mg·ml-1），同时正常对照组大鼠踝关节注射同体积的生理盐水，观察各组动物造模后不同时间点足趾容积变化；第7天灌胃1小时后取血，ELISA测定外周血血清中转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素1β(IL-1β)的变化，荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)检测外周血单核细胞Toll受体2(TLR2)、Toll受体4(TLR4)及髓样分化因子88(MyD88)的表达。取血后将大鼠处死，每只大鼠取其右后踝关节相同部位，切片作病理学观察。结果与模型组比较，在2小时、6小时2个剂量的中药药对组可显著性减小大鼠足趾容积（p<0.05），48小时、72小时3个剂量中药药对组足趾容积均显著减小，具有统计学意义（p<0.05）。3个剂量的虎杖-桂枝药对可以不同程度的减轻血管充血程度和减少关节滑膜炎症细胞的浸润反应。与模型组比较，3个剂量的虎杖-桂枝药对可显著减少IL-1β的含量（p<0.01)，促进TGF-β的表达，但无显著性差异；下调TLR2、TLR4及MyD88的基因的表达水平（p<0.05，p<0.01)，与阳性组相比，中剂量的虎杖-桂枝对MyD88、TLR4表达的抑制作用与阳性对照药秋水仙碱作用相近，差异无统计学意义（P>0.05）。　　结论：　　虎杖-桂枝药对干预大鼠急性痛风性关节炎实验中，3个剂量的虎杖-桂枝药对均可不同程度下调TLR2、TLR4及MyD88的基因表达和减少IL-1β的含量缓解大鼠急性痛风性关节炎，并且中剂量（7g·kg-1）可能是虎杖-桂枝药对发挥作用的最优剂量。2虎杖苷、桂皮醛对MSU诱导的THP-1细胞急性痛风炎症TLRs/MyD88信号通路影响　　目的：　　研究虎杖苷、桂皮醛抑制MSU诱导的THP-1细胞炎症反应的作用机制。　　方法：　　将THP-1细胞分为正常对照组、尿酸钠（MSU）模型组、阳性药秋水仙碱组（2ug·mL-1）、虎杖苷组（15ug·mL-1）、桂皮醛组（5ug·mL-1）、虎杖苷-桂皮醛组（20ug·mL-1）。所有组别细胞5％CO2、37℃培养24h后，给药组给予相应的药物，正常对照组和模型组用 DMSO补齐；2h后，除正常对照组其余实验组给予终浓度100ug·mL-1的MSU，正常对照组用PBS补齐；细胞置于5%CO2、37℃培养箱中培养24h后，收集细胞上清液及余下细胞。ELISA测定细胞上清液的肿瘤坏死因子 a（TNF-a）、白细胞介素1β（IL-1β）含量；荧光定量PCR检测TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB和TRIF基因表达; Westernblotting检测TLR2、TLR4、MyD88、TRIF蛋白的表达的影响。　　结果：　　与空白组比较，模型组THP-1细胞上清液TNF-a、IL-1β显著增加（p<0.01）；模型组的TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB和TRIF基因、蛋白表达均显著性增加（p<0.05，p<0.01)；与模型组相比，各给药组均能显著性降低THP-1细胞上清液TNF-a、IL-1β含量（p<0.01）；给药组均可不同的程度的下调TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB和TRIF基因表达（p<0.05，p<0.01)；虎杖苷组、桂皮醛组、虎杖苷-桂皮醛组TLR2、TLR4、MyD88、TRIF蛋白表达显著性降低（p<0.01）。　　结论：　　THP-1细胞实验中，虎杖苷、桂皮醛、虎杖苷-桂皮醛均对可以显著性降低MSU诱导的TNF-a、IL-1β含量和下调该信号通路的TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB和TRIF基因表达，抑制 TLR2、TLR4、MyD88、TRIF蛋白表达，提示虎杖苷、桂皮醛可能通过影响并抑制TLRs/MyD88通路发挥抗炎作用。