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本研究目的在于揭示奶牛乳腺上皮细胞高温应答机制及调控机理。实验首先构建奶牛乳腺上皮细胞培养体系，对细胞进行温度梯度处理，确定适宜的高温处理温度，在此基础上，进一步研究高温对乳腺细胞生物学活性的影响及作用机理。1奶牛乳腺上皮细胞的培养与鉴定运用差酶消化法和反复贴壁法建立体外奶牛乳腺上皮细胞培养方法，采用透射电镜、细胞流式术、免疫组化、免疫印迹等方法对乳腺上皮细胞特性进行检测。实验结果表明，运用本方法建立的奶牛乳腺细胞系上皮特性及遗传特征完备。2高温对乳腺细胞生物学特征的影响实验通过台盼兰染色、细胞流式术等方法研究高温对乳腺细胞活性、细胞周期及死亡率的影响。结果表明：（1）40℃／41℃高温可使乳腺细胞超微结构发生变化，表现为染色质浓缩、线粒体肿胀、空泡化，形成凋亡小体。（2）40℃／41℃高温可以抑制乳腺细胞的增殖，使细胞产生G2／M期阻滞，诱导乳腺细胞死亡，并随高温强度的增加而作用增强。（3）40℃／41℃高温可以诱导乳腺细胞产生热耐受性。3线粒体通路在高温诱导乳腺细胞死亡中的作用通过对细胞超微结构、细胞增殖、线粒体及相关分子的检测，研究40℃高温对奶牛乳腺上皮细胞的作用机制。结果表明，高温诱导的细胞的死亡呈经典的级联反应，即染色体分布边缘化、线粒体肿胀，线粒体膜电位差（△Ψm）降低，Bax／Bcl-2升高，Capsase-3活性极显著增加，DNA发生损伤。说明高温可通过线粒体途径诱导细胞的死亡。4高温应激状态下乳腺上皮细胞HSP72的表达及JNK激酶在乳腺细胞高温死亡中的作用应用RT-PCR、免疫组化、细胞流式术、JNK特异性激活剂／抑制剂等方法，研究与细胞热耐受性密切相关的HSP72表达规律和JNK激酶在乳腺上皮细胞高温应答中的作用。结果表明，（1）40℃高温诱导了奶牛乳腺细胞HSP72的表达，协助细胞获得热耐受性。（2）JNK激酶参与了40℃高温诱导的乳腺细胞死亡调控，抑制JNK激酶活性可以极显著地降低细胞死亡率。本实验研究了高温对奶牛乳腺上皮细胞的生物学作用，结果表明高温通过线粒体途径诱导细胞死亡，导致DNA的损伤，产生G2／M期细胞阻滞，抑制细胞增殖，同时又通过诱导HSP72的表达，协助细胞获得热耐受性。