【摘 要】
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恶性肿瘤是威胁人类健康和生命的顽症,近些年来在肿瘤的治疗方面虽然已经取得了长足的进步,但其治疗手段仍以化疗为主。目前化疗药物的毒副作用明显,所以新的抗肿瘤药物的开
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恶性肿瘤是威胁人类健康和生命的顽症,近些年来在肿瘤的治疗方面虽然已经取得了长足的进步,但其治疗手段仍以化疗为主。目前化疗药物的毒副作用明显,所以新的抗肿瘤药物的开发问题急需解决。早在1970年Pi erceetal就曾指出肿瘤的发生在很大程度上与生物发育有密切的关系。因此从发育的角度来研究肿瘤细胞凋亡逐渐引起人们的关注。本文分别利用孔雀鱼胚胎提取液、胚胎全蛋白、分子量介于3.4KD-8KD/14KD区间的胚胎蛋白质及分子量大于8KD/14KD胚胎蛋白质来诱导体外培养的HepG2细胞,结果表明胚胎提取液、胚胎全蛋白及分子量大于8KD/14KD胚胎蛋白质Ⅱ对HepG2细胞均有诱导凋亡的作用,而分子量介于3.4KD/8KD/14KD区间的胚胎蛋白质对HepG2细胞无诱导凋亡的作用。为了进一步确定可诱导HepG2细胞凋亡蛋白质的最佳提取条件,本试验采用温度系数小且溶解度大,不容易引起蛋白质变性的硫酸铵盐析法来提取孔雀鱼胚胎蛋白质。盐析法主要受硫酸铵饱和度、缓冲液pH值和样品浓度3个条件因素影响。本文采用响应曲面法中Box-Behnken程序来完成模拟控制实验,在上述3个单因素条件基础上,筛选出具有显著诱导HepG2细胞凋亡作用的蛋白质提取组合。根据中心组合BBD实验设计,采用3因素3水平的响应面分析法,以细胞凋亡率为响应值建立二次回归方程,通过响应面分析得到优化组合。在分析各个因素的显著性和交互作用后,得出可诱导HepG2细胞凋亡蛋白质的最佳提取条件,此时细胞凋亡率可达到最大值68.8836%,实际测定值67.87%与理论计算值吻合良好。
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