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1.背景: 妇科炎症是成年女性的临床常见疾病,具有发病率高、致病因素复杂、易复发等特点,给女性的工作和生活带来严重影响。目前,妇科炎症主要采用清除致病菌的抗生素疗法,但抗生素的使用同时会影响生殖道正常菌群,且耐药菌的大量出现也不容忽视。清热解毒燥湿药在中医临床中一直作为治疗妇科炎症的要药,经现代研究表明,大部分清热解毒燥湿药具有抗菌作用,这可能是此类药物广泛用于治疗妇科炎症的潜在原因。飞扬肠胃炎胶囊是国家批准的一种有效治疗急、慢性胃肠炎的中成药,组成药物飞扬草、火炭母、救必应均属于清热燥湿解毒类中药。基于人体是一个有机整体,胃肠道菌群和生殖道菌群有相似性的理论,我们推测飞扬肠胃炎胶囊可能对妇科炎症有治疗作用。因此,我们拟通过体外抑菌实验寻找飞扬肠胃炎胶囊的敏感菌,并建立念珠菌阴道炎模型和细菌性盆腔炎模型,探讨飞扬肠胃炎胶囊对这两种动物模型的治疗作用,在有效的基础上寻找主要功效成分,初步阐明其作用机制。 2.方法: 2.1 飞扬肠胃炎胶囊及其主要成分体外抗菌、抗病毒作用研究:采用微量倍比稀释和抗病毒实验法,选取12种标准菌、6种临床菌、4种病毒分别测定飞扬肠胃炎胶囊、缺药味药物、没食子酸、鞣花酸、紫丁香苷的最小抑菌浓度及对病毒的半数毒性浓度和半数效应浓度,并计算治疗指数。通过比较药物对各菌株的最小抑菌浓度,以及对病毒的治疗指数,评价药物的抗菌作用和抗病毒作用。 2.2 飞扬肠胃炎胶囊对念珠菌阴道炎小鼠的治疗作用研究:雌二醇诱导小鼠假发情期联合阴道接种念珠菌建立念珠菌阴道炎模型,建模3d后,灌胃飞扬肠胃炎胶囊治疗14d,给药结束取阴道分泌物涂片瑞氏染色及巴士染色,分别观察阴道内孢子、菌丝和中性粒细胞数量,分泌物划平板培养24h进行菌落计数,分离阴道组织进行病理切片,观察组织改变情况。 2.3 飞扬肠胃炎胶囊及主要成分对细菌性盆腔炎大鼠的药效及作用机制研究:大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合注入大鼠子宫建立盆腔炎模型,造模24h后各组分别灌胃飞扬肠胃炎胶囊、没食子酸、鞣花酸、紫丁香苷及主要成分随机配伍组合药物14d,给药结束后水合氯醛腹腔注射麻醉,观察子宫外观状况并进行半定量评分,分离子宫称重,计算子宫系数,10%甲醛固定后H&E染色观察病理改变情况并进行炎症评分,酶联免疫法检测血清中IL-1β、TNF-α、IL-10、MCP-1含量,Western Blot检测组织中NF-κB、Bcl-2及JNK通路相关蛋白含量。 3.结果: 3.1 飞扬肠胃炎胶囊及其主要成分的体外抗菌和抗病毒作用:飞扬肠胃炎胶囊对标准菌金黄色葡萄球菌的抑制作用最显著,其MIC值为1.56mg/mL;对福氏志贺菌和肠炎沙门菌的抑制作用显著,MIC值均为3.13mg/mL;对大肠杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌(产肠毒素株)、伤寒沙门、鼠伤寒沙门的抑制作用较显著,MIC值均为6.25mg/mL;对肺炎克雷伯菌的抑制作用极弱,MIC值为50mg/mL;而对白色念珠菌几乎无抑制作用,MIC值>100mg/mL。飞扬肠胃炎胶囊对临床菌包括大肠埃希菌、伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、福氏志贺菌、变形杆菌均表现出很强的抑制作用,其对应的MIC值分别为6.25、6.25、3.13、3.13、12.50mg/mL。通过对比分别缺少飞扬草、火炭母和救必应的药物粉末以及飞扬肠胃炎胶囊中的主要成分没食子酸、鞣花酸、紫丁香苷与飞扬肠胃炎胶囊的MIC值,我们发现飞扬草、火炭母和救必应均有一定的抗菌作用,其中救必应的抗菌作用略优于其他二味中药,且救必应中发挥抗菌作用的主要成分可能为紫丁香苷。飞扬肠胃炎胶囊对螺旋状病毒、诺瓦克病毒、星状病毒、腺病毒的杀灭作用很弱,其治疗指数分别为1.33、1.31、1.33、1.32。 3.2 飞扬肠胃炎胶囊对念珠菌阴道炎小鼠的治疗作用:飞扬肠胃炎胶囊不能减少念珠菌阴道炎小鼠阴道中的孢子、菌丝和中性粒细胞数量,对念珠菌阴道炎小鼠的组织病理改变没有影响;通过观察小鼠的行为学及外阴状况,我们发现模型组小鼠发展到后期外阴会出现不同程度的溃烂,但飞扬肠胃炎胶囊组小鼠无一例出现外阴溃烂情况,我们推测,念珠菌阴道炎小鼠感染后期可能由于外阴瘙痒等症状而对外阴进行抓挠,抓痕在粪便及垫料等的影响下受到细菌感染,最终引起外阴溃烂,而飞扬肠胃炎胶囊可能通过抗细菌感染的作用有效减少了小鼠的外阴溃烂。 3.3 飞扬肠胃炎胶囊及主要成分对细菌性盆腔炎大鼠的治疗作用和机制:飞扬肠胃炎胶囊、没食子酸、鞣花酸、紫丁香苷及主要成分随机组合药物对细菌性盆腔炎大鼠有显著治疗作用。与模型组比较,飞扬肠胃炎胶囊、没食子酸、鞣花酸、紫丁香苷及主要成分随机配伍组能不同程度的减轻模型大鼠子宫水肿充血和宫腔积脓程度,减少子宫组织中浸润的炎性细胞,降低血清中IL-1β、TNF-α、MCP-1同时升高IL-10含量,抑制NF-κB通路激活,下调Bax/Bcl-2蛋白比例。此外,飞扬肠胃炎胶囊、没食子酸和紫丁香苷还能下调p-JNK蛋白的表达。 4.结论: 4.1 飞扬肠胃炎胶囊及其主要成分的体外抗菌和抗病毒作用:本实验通过微量倍比稀释法和抗病毒实验证明了飞扬肠胃炎胶囊对常见菌具有显著的抑制作用,但其抗病毒作用较弱。其中,飞扬肠胃炎胶囊的敏感菌株为金黄色葡萄球菌、福氏志贺菌、肠炎沙门菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌(产肠毒素株)、伤寒沙门、鼠伤寒沙门和普通变形杆菌,且主要成分没食子酸、鞣花酸、紫丁香苷的抗菌作用与飞扬肠胃炎胶囊具有一致性。 4.2 飞扬肠胃炎胶囊对念珠菌阴道炎小鼠的治疗作用:飞扬肠胃炎胶囊对念珠菌阴道炎小鼠无治疗作用,不能减少小鼠阴道中的孢子数及中性粒细胞数;飞扬肠胃炎胶囊可减轻小鼠由于念珠菌阴道炎引起的外阴溃烂症状。 4.3 飞扬肠胃炎胶囊及主要成分对细菌性盆腔炎大鼠的治疗作用和机制:飞扬肠胃炎胶囊对细菌性盆腔炎大鼠有显著的治疗作用,且没食子酸、鞣花酸、紫丁香苷可能为其主要药效成分,作用机制可能与减少促炎因子、增加抑炎因子、调节NF-κB、JNK、Bcl-2通路相关蛋白表达有关。这一结果为飞扬肠胃炎胶囊的二次开发提供了有力的数据支持。