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目的:1.观察腹腔注射胰激肽原酶(Pancreatic Kallikrein,PKK)对1型糖尿病小鼠周围神经病变的影响。2.探讨葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)在糖尿病神经病理性疼痛中的作用。方法:1.建立糖尿病大、小鼠模型:选用Akita小鼠为自发性1型糖尿病小鼠模型,采用同等体重及周龄的野生型(WT组)C57BL/6小鼠为正常对照组。选用180g左右的雌性SD大鼠,腹腔一次注射链脲佐菌素(STZ,70mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型。三天后空腹血糖(FBG)超过15mmol/L为造模成功(DM组)。对照组(CON组)为腹腔注射同等体积的柠檬酸缓冲溶液。2.测定大、小鼠体重及血糖:每周用血糖仪测定各组大、小鼠尾静脉空腹血糖,用电子称测量各组体重。3.应用透射电镜(TEM)观察小鼠DRG神经元的超微结构,观察PKK对改善神经病变的疗效。4.实时定量PCR(Q-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western Blotting):检测各组大、小鼠L4-L6 DRGs中G6PD蛋白表达水平。5.后肢痛觉敏感性测定:分别用von Frey(0.4g-15.0g)细丝测定大鼠的机械性缩足反射阈值(paw withdrawal threshold,PWT)和热辐射法测定大鼠热缩足反射潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)以评价大鼠机械性触诱发痛和热痛觉过敏。6.鞘内注射给药:检测鞘内注射过表达G6PD腺慢病毒是否能够上调G6PD的表达及是否能够翻转后肢痛觉过敏行为。结果:1.和WT组相比,DM+NS组血糖明显升高,体重明显降低;DM+NS组和DM+PKK组相比,血糖及体重无明显差异。2.透射电镜图片显示与WT组相比,DM+NS组线粒体肿胀,微血管内微绒毛增多,微管结构排列紊乱,上述病理改变经PKK治疗后均有不同程度的改善。3.Q-PCR结果显示:和WT组相比,DM+NS组DRGs中G6PD的表达明显降低,而经PKK治疗后G6PD水平明显上调。4.糖尿病大鼠后肢特异性DRGs中G6PD蛋白表达水平明显低于对照组,鞘内注射过表达G6PD腺病毒能够上调G6PD的表达。5.STZ诱导糖尿病大鼠第2周出现糖尿病大鼠后肢机械痛和热痛觉过敏,一直持续到第四周,说明DM组疼痛阈值显著低于CON组;鞘内注射过表达G6PD腺病毒能够缓解后肢痛觉过敏。结论:1、慢性高糖状态下,糖尿病动物模型出现神经病变及痛觉过敏,其发生可能与G6PD降低导致氧化应激有关;2、PKK治疗能明显改善糖尿病所致的DRG神经元的超微结构变化,并逆转G6PD的异常改变,提示其对糖尿病神经病变具有一定的治疗作用。