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目的： 建立再生障碍性贫血小鼠模型，研究穿龙薯蓣皂苷对再障小鼠的药效学作用以及其分子机制，解析Wnt/β-catenin通路的激活与抑制对再障病理过程中的调控作用，寻找穿龙薯蓣皂苷发挥药效学作用的靶点。 方法： 1.模型建立与评价：采用 60Coγ射线照射联合尾静脉输入淋巴细胞的免疫介导法建立再障小鼠模型，通过观察血象、骨髓象评价模型成功与否。 2.实验分组及给药处理：选取SPF级BALB/c小鼠，雌雄参半，6～8周龄，体重20g±2g，将成模小鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、穿龙薯蓣皂苷组、西药对照环孢素组、中药对照雷公藤多苷组（n=6），进行干预。 3.相关指标检测：采用血细胞分析仪检测外周血象，瑞氏-姬母萨染色处理骨髓象，油镜下观察骨髓增生情况及细胞分类。 4. Wnt/β-catenin信号通路基因和蛋白的检测：采用实时定量基因扩增荧光检测系统(QPCR)技术检测Wnt1、Wnt3a、Wnt10b、β-Catenin、GSK3β、Axin 与 TCF4 的基因表达；采用 Western Blot 技术检测Wnt1、Wnt3a、Wnt10b、β-Catenin、GSK3β、Axin与TCF4的蛋白表达。 结果： 1.再障小鼠模型的建立及评估：造模后再障模型小鼠的血象（白细胞、血红蛋白、血小板）与正常组相比，模型小鼠血象三系减低，呈全血细胞减少，差异具有显著统计学意义（P＜0.01）。在骨髓象方面，正常对照组骨髓增生活跃，骨髓小粒造血细胞丰富。模型组骨髓中各系都有一定程度增生不良，反之，油粒增多，非造血细胞及脂肪细胞增多。 2.穿龙薯蓣皂苷对再障小鼠的药效学作用：经过治疗后，穿龙薯蓣皂苷组的小鼠外周血细胞三系数量均有回升，与模型组、正常对照组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）；骨髓象在治疗后有所恢复，造血细胞数量相比治疗前增多；提示穿龙薯蓣皂苷可以抑制骨髓间充质干细胞成脂化。 3. Wnt/β-catenin通路靶基因和节点蛋白的机制研究： 3.1.Wnt信号通路起始信号调控因子的检测。模型组Wnt1与Wnt3a的表达显著低于正常(P＜0.01)；穿龙薯蓣皂苷组Wnt1的基因和蛋白表达与模型组相比升高，差异具有统计学意义 (P＜0.05)；穿龙薯蓣皂苷组Wnt3a的基因和蛋白表达与模型组相比明显升高 (P＜0.01)；其中，穿龙薯蓣皂苷组与西药组环孢素的趋势一致，而中药雷公藤组对 Wnt3a 的表达未见明显调节作用。 3.2.Wnt 信号通路负向调控因子及相关因子的检测。再障模型小鼠的间充质干细胞Wnt10b与β-catenin的基因和蛋白表达受到明显抑制(P＜0.01)，同时GSK3β的基因和蛋白明显上调(P＜0.01)；穿龙薯蓣皂苷组能够显著提高 Wnt10b、β-catenin 基因和蛋白的表达，同时减低 GSK3β 的基因和蛋白表达(P＜0.01)，趋势与西药组相同，而雷公藤组对β- catenin和GSK3β基因和蛋白表达的影响差异无统计学意义。 3.3. Wnt信号通路下游调控因子的检测。模型组，Axin和TCF4的基因和蛋白水平明显升高 (P＜0.01)，穿龙薯蓣皂苷组Axin基因和蛋白表达被显著抑制 (P＜0.01)，TCF4基因和蛋白表达下降，与模型组相比具有统计学差异(P＜0.05)，与环孢素作用相似，而雷公藤组对Axin和TCF4的影响无统计学差异。 结论： 1.本实验采用免疫介导（采用 60Coγ射线照射联合尾静脉输入淋巴细胞）方法造模，模型稳定，造模成功；骨髓间充质干细胞向脂肪细胞诱导成功，为后续实验奠定良好基础。 2.动物实验证明：穿龙薯蓣皂苷能够缓解再障小鼠造血衰竭的严重程度，促进再障小鼠外周血象恢复并改善骨髓象，促进骨髓增生。同时，穿龙薯蓣皂苷能够一定程度上抑制小鼠骨髓成脂化诱导过程，从而发挥治疗再障的作用。 3.Wnt/β-catenin 信号通路在骨髓间充质干细胞的成脂过程中起重要的调控作用，在模型小组中均观察到了 Wnt/β-catenin 通路关键基因/蛋白的表达变化。实验表明，穿龙薯蓣皂苷能够调节Wnt/β-catenin信号通路的基因和节点蛋白，进而调控造血微环境，使机体造血功能恢复正常，其作用的相关因子可能是中药的起效靶点，但尚需进一步的临床试验研究。