翼手目(Chiroptera)动物,俗称蝙蝠,该类群具有高度的多样化特征,是哺乳纲动物中的第二大目,仅次于啮齿目(Rodentia),占哺乳动物的1/4以上,目前世界已正式描述并报道的翼手目种类有2亚目18科202属1134种。迄今为止,已有超过200种病毒在蝙蝠中被检测并报道,并且随着研究的深入还有更多的新病毒在蝙蝠身上被发现。蝙蝠病毒在公共卫生安全上也一度被忽视,在新发现的蝙蝠病毒传染病中,约75%的是人畜共患型病毒。蝙蝠已经被确认是人畜共患病毒的重要自然宿主。我国现正式描述并报道的翼手目有2亚目8科(长翼蝠亚科Miniopterinae独立为长翼蝠科Miniopteridae)140多种,随后近十年内在我国广西、云南、贵州和台湾等地相继又发现蝙蝠新种10余种。其中,云南省翼手目物种数量2亚目7科26属80种及广西壮族自治区翼手目物种数量2亚目7科22属57种,在中国都处于前列,且两地均开展了关于翼手目动物携带病毒的相关研究。据统计目前贵州省翼手目物种数量为2亚目7科19属65种,然而在贵州蝙蝠携带病毒方面的研究还处于空白,为了有效地防控新发传染病的出现或暴发,同时监测外来病传入的风险,因此全面掌握贵州省地区以蝙蝠为自然宿主或中间宿主的病毒本底数据具有非常重要的实际意义。1结果与讨论在本研究中采用病毒宏基因组方法对贵州省境内蝙蝠病毒进行调查,主要的样本是蝙蝠的新鲜粪便,另外采用小RNA病毒检测的方法对同区域内蝙蝠携带病毒进行调查,主要的样本内容是蝙蝠的脏器组织样,包括直肠、肝脏和肺。本研究从菊头蝠科和蹄蝠科中的四种蝙蝠中共检测出53科111属170余种病毒。1.1病毒宏基因组学检测结果本次调查共收集到258份蝙蝠粪便样品(涵括2科6属10种),其中质检合格进行了后续分析的大蹄蝠样品采样情况:从贵州省9个县市采集到157份粪便样品,占总粪便样品样数量的62.06%。先后分别通过Nt和Nr病毒数据库比对组装得到的406061条Contigs,共得到8149条Contigs是病毒相关序列,占20.07%。对这些病毒序列进一步鉴定分类,可分为49科(包含了Mimiviridae和Pandoravirus)103属。将注释完成的病毒序列按宿主源分类:细菌病毒序列4456条,分布于10科21属,总序列中占比65.13%;昆虫病毒序列998条,分布于8科13属,总序列中占比14.63%;脊椎动物病毒序列975条,分布于23科49属,总序列中占比14.22%;植物病毒序列412条,分布于10科19属,总序列中占比6.02%。1.2 sRNA病毒检测结果小RNA病毒检测方案中从贵州省内采集到蝙蝠样本253份,其中质检合格进行了后续分析的三组样采样情况分别为:皮氏菊头蝠组织样分别从7个县市采集到51份,占总样品总数量的19.77%;三叶蹄蝠组织样分别从2个县市采集到24份,占总样品总数量的9.3%;贵州菊头蝠组织样只在荔波县采集到27份,占总样品总数量的10.47%。通过sRNA病毒检测分析,共鉴定出病毒序列195条,完成分类的有156条,注释得到19科31属73种病毒,其中未做到分类的病毒16种共计39条序列,各组的病毒鉴定情况在后面有详细描述。将注释完成的病毒序列按宿主源分类:脊椎动物病毒序列81条,9科13属,总序列中占比51.92%;昆虫病毒序列13条,3科4属,总序列中占比8.33%;植物病毒序列28条,1科3属,总序列中占比17.95%;细菌病毒序列34条,6科8属,总序列中占比21.79%。1.3贵州省蝙蝠携带病毒的本底构建通过病毒宏基因组学和sRNA病毒检测技术相结合,成功获得了贵州省15个县市的蝙蝠携带病毒的病原生态学的情况,标记出了具有重大流行性病毒种类和巨大病毒在蝙蝠中的新发现病毒种类,为全面掌握贵州省蝙蝠病毒本底提供了重要的基础数据。1.4两种病毒检测技术的比较sRNA病毒检测技术作为在蝙蝠病毒检测中全新的尝试,取得了一定的成果,为今后蝙蝠病毒的研究工作提供了新技术路线,与病毒宏基因组学研究相比较,虽然存在病毒检测范围较窄的问题,但检测高效且准确,且节约经费。根据本研究的采用sRNA病毒检测结果,证实了该检测技术适用快速从样本中检测出多种对脊椎动物具有感染致病性的病毒种类。此外,还证实可用于巨大病毒的检测。1.5不同蝙蝠科病毒多样性分析Shannon-Wiener指数分析得出菊头蝠科蝙蝠与蹄蝠科蝙蝠携带病毒的多样性在科、属、种水平上均存在明显差异,菊头蝠科蝙蝠中携带病毒组成的多样性要高于蹄蝠科蝙蝠。导致出现这种差异的主要原因可能是贵州省这两个蝙蝠科的起源与扩散历史,以及蝙蝠的物种多样性和栖息特征差异。1.6病毒组分分析及公共卫生安全建议成功评估了贵州省蝙蝠携带病毒的丰富度高于同属西南地区的广西和云南两地的特点,且在感染脊椎动物病毒种类分析比较中尤为明显,造成这一现象的原因可能是:贵州省独特的喀斯特地貌和气候条件,以及适应于这样环境下的特殊的人们生活习惯;根据病毒的组分分析结果,挑选出来具有重大卫生学意义的病毒种类,并检测到了新人兽共患蝙蝠病毒种类沙粒病毒,以及在在其它研究中较少检出的病毒种类披膜病毒和呼肠孤病毒等。本论文提出了在蝙蝠病毒防控措施上的4点建议,对防止蝙蝠病毒在的传播和扩散具有重要的卫生学意义。1.7巨大病毒的讨论分析首次从蝙蝠体内检测到巨大病毒,包括了Moumouvirus、Megavirus、Marseillevirus、Cafeteriavirus、Pandoravirus,丰富了巨大病毒的宿主范围;本研究在蝙蝠粪便样品和脏器组织样品中均检测到,说明巨大病毒具有通过蝙蝠粪便向外传播的能力。进一步结合蝙蝠强的飞行迁徙能力,有力的证实了该病毒在分布上的广泛性,为今后研究巨大病毒的起源与扩散途径提供帮助。