钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(sodium taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)是第10个溶质转运蛋白(solute carrier SLC10)家族的一名成员。NTCP蛋白特异性地在肝细胞的基底膜上表达,其负责调控肝肠的胆汁酸循环,以维持机体的胆汁酸平衡。最新研究发现,NTCP蛋白是乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)和丁型肝炎病毒(Hepatitis D virus,HDV)感染肝细胞的功能性受体。所以获得NTCP的结构,对乙肝的治疗及对NTCP的功能的进一步阐述具有重大意义。本课题以人类、小鼠、大鼠、树鼩、食蟹猴的NTCP蛋白为研究对象,根据这5个物种的NTCP片段设计相应的引物,克隆出这5种NTCP基因片段,并分别构建重组表达载体,以昆虫细胞为表达宿主,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统获得目的蛋白。通过Ni柱亲和层析对目的蛋白进行富集粗提;然后利用AKTA FPLC纯化系统,通过Superdex200观察目的蛋白与不同去垢剂的结合情况,找出合适的去垢剂用于蛋白的纯化,为后续的结晶做准备。本课题通过PCR反应获得了人类、小鼠、大鼠、树鼩、食蟹猴的NTCP基因片段,并将这些NTCP基因片段分别与带有不同标签的p Fast Bac构建了重组载体。利用这些重组载体转化DH10感受态细胞,再通过蓝白斑筛选得到了带有不同标签的NTCP重组黏粒。用转染试剂将这些NTCP重组黏粒转染昆虫细胞获得重组杆状病毒用于感染昆虫细胞,实现了带不同标签的NTCP蛋白在昆虫细胞中的表达。通过对比这些NTCP蛋白在昆虫细胞中的表达量,发现带SUMO标签和MBP标签的树鼩的NTCP蛋白的表达量较多。观察带MBP标签的树鼩的NTCP蛋白在Superdex200与不同去垢剂的结合情况,发现树鼩的NTCP蛋白在去垢剂C325S中有较好的行为表现。最后,在纯化树鼩的NTCP蛋白时,让树鼩的NTCP蛋白先与多肽Myr47结合后,再观察其在去垢剂C325S中的行为表现,发现树鼩的NTCP蛋白先与多肽Myr47结合后,聚合的树鼩的NTCP蛋白减少了。本课题的研究为抗HBV新药的研发提供一些参考价值。