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戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus, HEV)是引起戊型肝炎的病原体,是导致急性肝炎的主要病原体之一。戊型肝炎病毒主要流行于发展中国家,而在发达国家呈散发性流行,现已成为全球的重大公共安全卫生问题。然而迄今为止,市场上还没有对戊型肝炎有特效治疗的药物。因此,对于HEV的防治,防控是关键。本研究对昆明市人群和动物进行了血清流行病学和分子流行病学调查,对昆明市流行的HEV毒株进行系统进化分析,并对HEV ORF2部分衣壳蛋白进行克隆与表达,分析其抗原性。本研究：1)采用酶联免疫吸附测试(ELISA)的方法对收集到的孕妇血清234份、儿童血清90份及42份树鼩血清进行抗-HEV IgG抗体检测,对部分孕妇血清样品(139份)检测了抗-HEV IgM抗体,调查HEV抗体流行情况；2)用RT-nPCR方法对所有抗体阳性血清、168份普通人群的粪便样品、48份孔雀粪便样品、58份红嘴鸥粪便样品、12份树鼩粪便样品及180份猪粪样品进行HEVRNA检测,调查HEV分子流行情况；3)对检测到的HEV核酸序列进行序列比对、同源进化分析、构建系统进化树；选取昆明市主要流行的HEV毒株,采用RT-nPCR的方法扩增HEV全基因组序列,并进行同源进化分析；4)此外,通过PCR的方法扩增HEV ORF2部分基因,构建pFN18the/ORF2重组表达载体,进行重组蛋白的诱导表达与纯化,Western-Blot分析其抗原性。研究结果显示：1)抗-HEV IgG抗体在昆明市区孕妇儿童人群中的阳性率为9.26%,在孕妇中的阳性率为11.55%,而在儿童人群中的阳性率为3.33%,孕妇高于儿童,差异显著(p<0.05)；在不同孕期的孕妇人群中,HEV IgG抗体在处于妊娠晚期孕妇中的流行率(13.79%)>妊娠中期(10.31%)>妊娠早期(10%)；在不同年龄组的孕妇中,20-25岁年龄组有较高的阳性率(16%),而在>30岁年龄组中的流行率较低(2.94%)；HEV IgG抗体在男性儿童(3.92%)中的流行率高于女性儿童(2.56%),差异显著(p<0.05),在≤1岁组的儿童中有较高的流行率(4.26%)；对部分孕妇血清HEV IgM抗体的结果显示,HEV IgM抗体在孕妇中流行率为1.44%；对42份树鼩血清进行IgG抗体检测,但没有检测到阳性样品。2)采用RT-nPCR方法对所有抗体阳性血清、168份普通人群的粪便样品、孔雀、红嘴鸥及树鼩粪便样品进HEV分子流行病学调查,但没有检测到HEVRNA阳性样品,而在收集到的猪粪便(180份)中共检测到9份阳性样品,阳性率为5%。3)对检测到的HEV进行序列比对、构建系统进化树,进行同源进化分析,结果表明昆明市流行的HEV毒株为4型毒株。通过RT-nPCR方法扩增到昆明市流行的HEV毒株的全基因组序列,核苷酸同源性分析显示,其与新疆株Gul9961(猪源)有较高的同源性(96.2%)。4)成功构建pFN18the/ORF2重组载体,转化大肠杆菌KRX后,诱导表达出了Halo-ORF2重组蛋白,对该重组蛋白进行纯化,纯化后蛋白纯度达90%以上,用HEV IgG抗体阳性血清作为一抗,经Western-Blot分析,重组蛋白Halo-ORF2能够与之发生良好反应,表明该蛋白有良好的抗原性。本研究初步掌握了昆明市人群和动物中HEV的基本流行情况和昆明市流行的HEV毒株基因型及获得了HEV全基因组序列,研究结果表明昆明市人群存在HEV感染风险。本研究为今后该地区开展HEV的防控、疫苗的研制提供有效数据。此外,成功获得HEV ORF2融合蛋白,实验证明该蛋白具有良好的抗原原性,为今后HEV诊断抗原的研制、抗原表位的筛选奠定一定基础。