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水貂病毒性肠炎是由水貂肠炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)引起的一种急性高度接触性传染病,是危害养貂业的主要病毒性传染病之一,给世界水貂养殖业造成了重大的经济损失。在固有免疫中,Ⅰ型干扰素(Type Ⅰ interferon,IFN-Ⅰ)是最重要的抗病毒细胞因子,它不仅可以诱导多种抗病毒基因的表达,发挥抗病毒作用,还能调节固有免疫和适应性免疫反应。大多数病毒感染都能诱导IFN-Ⅰ的产生,但MEV感染却抑制IFN-Ⅰ的表达,其机制至今并不清楚。为了进一步了解MEV与其宿主间的相互作用,本课题对MEV抑制IFN-Ⅰ的诱导产生的机制进行了深入研究。本论文研究发现,MEV感染CRFK细胞不能诱导产生IFN-Ⅰ。我们利用qPCR的方法检测了 MEV感染CRFK细胞后不同时间点IFNα、IFNβ及其下游干扰素刺激基因(Interferon-stimulated genes,ISGs)的 mRNA 表达情况,发现 MEV 感染下调了 IFNα、IFNβ和ISGs的表达;而且也抑制poly(I:C)诱导的IFNβ的表达;用外源干扰素IFNα预先处理CRFK细胞6h,发现IFNα对MEV病毒的感染和复制都没有影响。进一步研究发现,MEV的非结构蛋白NS1能显著下调IFNβ的表达;经对NS1结构域的截短片段分析,发现NS1的DNA结合结构域发挥了主要抑制作用;应用染色质免疫共沉淀等技术证明,NS1直接结合在IFNβ的启动子区域抑制其转录。IRF3和NF-κB信号通路对IFN-Ⅰ的诱导产生至关重要,进一步研究发现,NS1下调了信号分子STING、MAVS、TBK1和IKKβ诱导的IRF3和NF-κB信号通路的激活。通过Western blot和激光共聚焦实验发现,NS1通过抑制IRF3和TBK1的磷酸化来阻断IRF3信号通路的激活,但并不影响IRF3的入核。同时还发现,NS1也抑制IκBα的磷酸化降解和p65的磷酸化入核;免疫共沉淀和激光共聚焦实验进一步证明NS1与IKKβ结合干扰IKKβ-IKKα和IKKβ-NEMO的相互作用,减弱IKK复合体的形成,阻断NF-κB信号通路从而抑制IFNβ的转录激活。IKKβ的激酶结构域(Kinasedomain)可促进IκBα的磷酸化降解过程,对IKKβ结构域的截短片段分析,证实了 NS1能够与IKKβ的激酶结构域结合。以上研究结果表明,MEV感染CRFK细胞既不能诱导IFN-Ⅰ的产生,对外源干扰素也不敏感,而且还能抑制IFN-Ⅰ的产生;MEV的非结构蛋白NS1直接结合在IFNβ的启动子区域抑制IFNβ的转录,或靶向IRF3和IKKβ分别抑制IRF3的磷酸化和干扰IKK复合体的形成,阻断IRF3和NF-κB信号通路,从而抑制IFNβ的转录激活。本研究不仅探讨了MEV抑制IFN-Ⅰ诱导产生的机制,同时对MEV的致病机理和新型弱毒疫苗的研发提供了新的理论基础和思路。