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目的:探讨选择性环氧合酶-2 (COX-2)抑制剂Nimesulide对人肝癌细胞株SMMC-7721生长抑制和诱导凋亡的作用,并对其机制做进一步探讨;及联合顺铂(Cisplatin、DDP)或奥沙利铂(Oxaliplatin、L-OHP)的协同作用。方法:1人肝癌细胞株SMMC-7721用含不同浓度(0,25,50,100,200,400μmol/L)Nimesulide的培养基培养24、48、72h。采用倒置显微镜观察细胞形态学改变,四氮唑盐比色法(MTT法)观察细胞增殖活力的改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫组化法检测SMMC-7721细胞中Bcl-2、Cox-2、Bax蛋白表达的变化;用ELISA法检测细胞培养液上清中PGE2的变化;筛选一个浓度做联合用药实验。2人肝癌细胞株SMMC-7721用含不同浓度DDP或L-OH(P0.5、1.0、2.0、4.0mg/L)、及联合含Nimesulide的培养基培养48h,采用倒置显微镜观察细胞形态学改变,四氮唑盐比色法(MTT法)观察细胞增殖活力的改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:1 Nimesulide对人肝癌细胞株SMMC-7721有生长抑制作用,并呈剂量和时间依赖性。流式细胞仪检测分析发现Nimesulide可有效诱导SMMC-7721细胞的凋亡。免疫细胞化学结果显示,对照组细胞胞浆内可见大量棕黄色颗粒,染色较深,提示Bcl-2和COX-2蛋白高表达,Nimesulide浓度逐渐增加处理48h后观察,细胞形态不规则,表达棕黄色颗粒的细胞数逐渐减少,并且染色也逐渐变淡,提示在Nimesulide作用下,Bcl-2和COX-2蛋白的表达逐渐下降,而Bax蛋白表达随着作用药物浓度增加,产生棕黄色颗粒的阳性细胞逐渐增多;随着Nimesulide浓度的增加,PGE2的释放量明显下降,与对照组比较有显著差异P(<0.05),提示COX-2活性受到抑制。Nimesulide浓度为50μmol/L可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,选用该浓度做联合用药实验。2 DDP或L-OHP(0.5、1.0、2.0、4.0mg/L)对人肝癌细胞株SMMC-7721有生长抑制作用,并呈剂量依赖性;并且L-OHP抑制作用较DDP强。Nimesulide 50μmol/L与DDP或L-OHP联合使用时,联合抑制作用呈现协同作用(q>1.15)。流式细胞仪检测分析发现两种铂类药物均可有效诱导SMMC-7721细胞的凋亡,且与Nimesulide联合时诱导效应增强。结论:Nimesulide可明显抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖,且呈时间、剂量依赖性。Nimesulide抗肿瘤的作用机制除了其对COX-2抑制作用外,还可能与下调Bcl-2、上调Bax的表达有关。DDP,L-OHP与Nimesulide联合可明显增强抑癌效果,而且呈协同作用。