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B淋巴细胞刺激因子BAFF(B cell activating factor belonging to the TNF family)，是一种B淋巴细胞的共刺激因子；属TNF超家族成员。Schneider et al．(2004)成功克隆了鸡BAFF基因，国内对鸡BAFF的研究尚未起步。中国三黄鸡是中国常见的地方品种鸡，本研究根据GenBank提供的鸡BAFF基因序列(GenBank索取号AF506010)，设计引物，通过逆转录-聚合酶链式反应，首次从中国三黄鸡脾组织细胞中分别扩增得到864bp的鸡B淋巴细胞刺激因子(CycBAFF)基因和459bp的鸡可溶性B淋巴细胞刺激因子(CycsBAFF)基因片段，一方面通过大肠杆菌系统表达了CycsBAFF蛋白，并对其进行纯化，Western blot，复性和活性的鉴定；另一方面，利用巴斯德毕赤酵母(pichiapastoris)成功构建了重组CycsBAFF真核表达载体，为真核表达实验奠定了基础。此外，我们还制备了兔抗CycsBAFF多克隆抗体，通过间接ELISA方法检测了其效价，以及Western blot检测其与抗原的结合性。
1.CycsBAFF的原核表达和活性研究将CycsBAFF片段克隆入原核表达载体pET-28a，转化大肠杆菌BL21(DE3)后高效表达了带有His<,6>标签的包涵体形式重组蛋白，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫转印检测鉴定。表达产物经Ni<2+>-NTA纯化后，经透析复性得到活性目的蛋白，通过单独刺激以及与PMA共刺激体外培养的鸡法氏囊B细胞，经MTT法检测，均有明显的促法氏囊B细胞存活的效应。
2.CycsBAFF真核表达载体的构建将扩增得到的CycsBAFF片段与毕赤酵母表达载体进行连接，得到重组载体 pPIC9-CycsBAFF，线性化后转化酵母细胞GSll5。
3.兔抗CycsBAFF多克隆抗体的制备及鉴定通过皮下注射重组CycsBAFF蛋白，制得抗CyesBAFF多克隆抗体，间接ELISA法检测抗血清效价为20000倍；并通过Western blot分析抗体的特异性。本研究为建立双抗夹心ELISA方法奠定基础。