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本文研究目的在于探讨RNA干扰抑制Stat3表达的作用,及siRNA抑制Stat3表达对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响和在成瘤裸鼠体内的作用。通过设计针对Stat3的特异性siRNA并转染入前列腺癌细胞,观察其对Stat3表达的抑制作用及对细胞生长、增殖及凋亡的影响,进一步构建表达Stat3-shRNA的载体系统,观察对裸鼠移植瘤的治疗作用,并转染前列腺癌细胞形成稳定表达细胞,观察其对细胞的作用及裸鼠的致瘤作用。
本文筛选出的siRNA序列,采用以质粒为基础的人U6RNA聚合酶Ⅲ启动子系统pSilencerTM2.1-U6,构建Stat3特异发夹状siRNA的表达载体,双酶切及测序鉴定重组体,并转染入PC-3细胞,G418筛选稳定表达细胞,荧光定量PCR及Westernblot检测Stat3mRNA和蛋白的表达,MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡。揭示了Stat3-shRNA表达载体对裸鼠体内移植瘤具治疗作用,可抑制肿瘤生长,与对照组具显著差异(p<0.05)。成功构建Stat3-shRNA表达载体,此表达载体可在前列腺癌细胞及裸鼠体内长期而有效地抑制Stat3的表达,逆转前列腺癌细胞恶性表型及致瘤能力,并对成瘤裸鼠具有一定治疗作用,因此以Stat3为靶基因的RNA干扰技术可成为极具潜力的前列腺癌基因治疗方法。