肉苁蓉多糖及其锌配合物的制备、结构表征及抗氧化活性研究

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列当科寄生植物肉苁蓉(Cistanche deserticola Y.C.Ma),广泛分布于非洲和亚洲西部,其干燥带鳞叶的肉质茎被传统用于促进血液循环、治疗阳痿、治疗腰痛及不孕不育等。肉苁蓉中含有苯乙醇苷类、多糖、木脂素、酚类等活性成分,具有抗氧化、降血糖、降血脂、抗肿瘤等药理活性,目前研究主要集中在肉苁蓉苯乙醇苷类物质,关于肉苁蓉多糖研究的报道少。因此,本文以肉苁蓉属中的管花肉苁蓉肉质茎为原料,采用响应面分析法(RSM)优化其粗多糖的超声酶法辅助提取工艺,获得最佳提取工艺;采用红外光谱(FT-IR)、圆二色谱(CD)、原子力显微镜(AFM)、扫描电镜(SEM)及气相色谱(GC)等方法比较不同提取方法获得的粗多糖的结构特征并研究其抗氧化活性;采用季铵盐沉淀法对粗多糖的精制工艺进行研究,获得最佳精制条件;采用肉苁蓉精制多糖与硫酸锌反应制备肉苁蓉多糖锌配合物,并研究其结构和抗氧化活性。主要研究内容和结果如下:  1、肉苁蓉肉质茎的成分分析及其粗多糖的超声酶法辅助提取工艺研究。采用国标法对肉苁蓉茎进行基本成分分析,结果表明,其水分、灰分、粗蛋白、粗脂肪及总糖含量分别为:4.40%、3.32%、7.69%、1.18%及45.35%。采用RSM法优化了肉苁蓉粗多糖的提取工艺,最佳提取工艺条件为:纤维素酶添加量2.5%,反应pH值5.2,超声温度54.1℃C,超声时间31.5 min,该工艺条件下,肉苁蓉粗多糖得率和含量分别为22.31%和48.50%。与常规热水法提取相比,超声酶法辅助提取粗多糖得率提高了44.96%,且提取时间短,能耗低,在粗多糖提取方面有较好的应用前景。  2、肉苁蓉粗多糖的初步表征及抗氧化活性研究。采用FT-IR、CD、AFM、SEM及GC等现代分析方法,对常规热水法、酶辅助法、超声辅助法及超声酶辅助法提取的四种粗多糖HWEP、EAEP、UAEP及UCEP进行研究,FT-IR分析表明,不同方法分离获得的四种粗多糖主要官能团基本相似;SEM和AFM结果表明,与HWEP相比,EAEP、UAEP及UCEP的表面形态均发生改变;GC分析表明,不同方法分离获得的四种粗多糖单糖组成相同,均由鼠李糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔比分别为1.86∶1∶17.08∶1.74,4.97∶1∶12.42∶1.31,3.79∶1.24∶17.91∶1和2.18∶1∶28.29∶1.43。体外抗氧化活性研究表明,不同提取方法获得的四种粗多糖对DPPH、OH及ABTS自由基均有一定的清除能力,其中UCEP对DPPH自由基清除活性最高,多糖浓度为1000μg/ml时清除率达到84.59%,常规热水法得到的多糖对OH自由基和ABTS自由基清除活性最高,多糖浓度为1000μg/ml时清除率分别为60.45%和86.36%。  3、UCEP的精制、精制组分锌配合物的制备、结构表征及抗氧化活性研究。优化了UCEP的季铵盐沉淀法,其最佳精制条件为:CTAB浓度为3.0%,粗多糖浓度为0.8%,该条件下,精制多糖(UCEP1)得率和含量分别为44.09%和70.13%。采用UCEP1与硫酸锌制备得多糖锌配合物(UCEP1-Zn),EDTA滴定法分析其锌含量为7.57%;FT-IR分析表明,UCEP1中-OH和-COO-和Zn2+发生了配位;CD分析表明UCEP1-Zn形成后,多糖链构象发生变化;AFM及SEM分析表明UCEP1-Zn形成后,多糖分子间及表面形貌发生变化;XRD分析表明锌与肉苁蓉多糖经过配位作用形成了一种新的化合物。体外抗氧化活性研究表明,UCEP1-Zn的抗氧化能力显著高于UCEP1,且对ABTS自由基清除活性最好。可见,UCEP1-Zn在补锌剂的开发方面具有很好的应用价值。
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