龙葵中甾体类生物碱的提取、纯化及分析方法研究

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本文研究了天然植物龙葵(Solanum nigrum L.,S.N.L.)中甾体类生物碱(Steriodal Alkaloids)的提取、纯化及测定方法。在此基础上,就长沙市岳麓山龙葵果实成长期内甾体类生物碱的形成、变化趋势进行了探讨。 1、确定了龙葵植物体内甾体类生物碱、澳洲茄胺的提取方法及其提取工艺参数。 经比较加热回流醇提法(酸性条件)、碱浸法、超声波辅助醇提法三种提取工艺,得出:加热回流醇提法提取甾体类生物碱效率最佳,龙葵茎叶中澳洲茄胺的平均得率为O.42%,果实中澳洲茄胺的平均得率3.22%;超声波辅助醇提法提取龙葵甾体类生物碱具有操作简单、提取时间短的优点,但提取效率稍低;碱浸法提取率最低。 采用加热回流醇提法提取龙葵生物碱的最佳实验条件为:水浴温度为65℃、乙醇浓度为95%、水浴加热时间2h。各因数对澳洲茄胺得率的影响大小分别为:回流时间>物重(固定液料比)>乙醇浓度=温度。 澳洲茄胺的最佳水解条件为:采用40mL2mol/L HCI:无水乙醇=1:1(v:v)的溶液溶解甾体类生物碱,在100℃下水解2h。 2、经结晶法初步纯化甾体类生物碱后、采用NKA-9大孔吸附树脂动态程序洗脱法对澳洲茄胺进行纯化处理,可得到很好的分离纯化效果:澳洲茄胺在树脂中的吸附率、总收率分别达到99%、98%以上,熔点为192-194℃。 程序洗脱的步骤为:将含澳洲茄胺的甲醇溶液定量取出并减压蒸干后,残留物用0.5mol/L的HCl溶解,移至分液漏斗,NaOH溶液调节pH至10.5,将溶液移入装有树脂的层析柱,分别采用浓度为20%、40%、60%的甲醇lOOml溶液洗脱后,再用lOOml浓度为60%、pH分别为4.0、3.5、2.7的甲醇溶液洗脱,取浓度为60%、pH为2.7的甲醇溶液即得到澳洲茄胺的纯化物。 3、建立了甾体类生物碱、澳洲茄胺的定性、定量检测方法。高效液相色谱测定甾体类生物碱及其苷元澳洲茄胺的最佳实验条件为:以C18硅烷基键合相为固定相,紫外检测波长210nm,流动相选择乙腈:水为55:45(水相pH用磷酸调节至2.7),流速1.2mL/min。 4、经考察龙葵不同药用部位中甾体类生物碱的含量变化发现:澳洲茄胺单体以盐的形态在龙葵未成熟果实、龙葵茎叶中所占的质量分数少,它主要以苷元的形态存在于龙葵果、龙葵茎叶的生物碱盐中;在龙葵果的生长过程中,生长期和阳光是影响龙葵果内甾体类生物碱含量变化的重要因素。
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