禽流感（avian influenza, AI）是由A型禽流感病毒（avian influenza virus, AIV）引起的一种传染病，主要感染鸡、鸭等家禽，某些情况下也可以感染哺乳动物，对公共卫生有重要影响。禽流感病毒包含8段病毒RNA（vRNA），是单链、负义、分段的RNA基因组。NS1蛋白由第八段未拼接的mRNA编码，它不是病毒粒子的结构成分，但在感染细胞中的表达水平很高。本研究利用常规的细胞复苏技术将可稳定分泌抗NS1蛋白单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞复苏扩大培养后，注入8周龄SPF级BALB/c小鼠腹腔，制备腹水，对采取的腹水进行Western blotting鉴定表明，该腹水中含有大量高浓度的McAb。亚型鉴定结果表明，该株McAb为IgG1型，轻链为κ链。利用Protein G纯化鉴定后的腹水，SDS-PAGE电泳鉴定结果表明纯化效果良好，可用于后续表位的鉴定。利用噬菌体7肽库筛选纯化后腹水，经过三轮筛选后，挑取24个噬菌体单克隆进行扩增，纯化测序模板并进行测序。有19个噬菌体单克隆测序成功，得到19段多肽序列，利用DNAstar软件分析其共有序列为NFFTQAL，但与本研究所用毒株的NS1蛋白编码的蛋白质序列比对后未发现NS1蛋白的氨基酸序列上有其同源序列。因此，选取了另一种鉴定抗原表位的方法—多肽芯片技术。利用多肽芯片技术对该McAb进行抗原表位的鉴定。鉴定结果表明29DAPF32为McAb针对的抗原表位。合成多肽DAPF，利用点印记和大分子相互作用方法验证了该段多肽与单抗的特异性结合。将NS1蛋白中DAPF缺失，利用间接免疫荧光鉴定McAb与表达NS1（-DAPF）蛋白的细胞结合明显弱于McAb与表达NS1蛋白的细胞结合，进一步验证了单抗与NS1蛋白上DAPF的结合。本研究利用噬菌体肽库技术和多肽芯片技术对McAb的抗原表位进行鉴定，得到了McAb针对的抗原表位29DAPF32。该抗原表位的成功鉴定为进一步针对NS1蛋白建立诊断方法以及研究NS1蛋白的结构和功能提供了有力工具。