野艾蒿(Artemisia lavandulaefolia)是一种资源丰富的野生药用植物。本工作在鉴定其所含酚酸类物质的基础上,对其中的二咖啡酰奎尼酸进行提取和分离纯化,并利用微生物对其黄酮成分野黄芩苷进行生物转化研究,相关工作如下:(1)首次对野艾蒿中咖啡酰奎尼酸类物质进行了系统地分析及鉴定。利用LC/MS鉴定了野艾蒿中咖啡酰奎尼酸类物质的结构,共鉴定出18种咖啡酰奎尼酸类物质,包括3种单咖啡酰奎尼酸、6种二咖啡酰奎尼酸、1种三咖啡酰奎尼酸,3种阿魏酰奎尼酸、3种咖啡酰-阿魏酰奎尼酸、1种二阿魏酰奎尼酸和1种咖啡二甲氧肉桂酰奎尼酸(其中单咖啡酰奎尼酸和二咖啡酰奎尼酸含量高于其它成分):在野艾蒿中还发现了黄酮成分芦丁和野黄芩苷。(2)本工作发现用石油醚对野艾蒿进行脱脂预处理,可以很好地保留其中的二咖啡酰奎尼酸物质,且此脱脂预处理可得到野艾蒿的挥发油成分。根据Box-Behnken中心组合实验设计原理,采用四因素三水平响应面分析法,考察了乙醇浓度、温度、时间及料液比对二咖啡酰奎尼酸得率的影响。结果表明各因素的影响次序为:乙醇浓度>温度>料液比>时间;在乙醇浓度72%、温度53 ℃、料液比1:54(g/mL)的条件下提取102 min,野艾蒿中二咖啡酰奎尼酸得率为3.30%,提取率可达91.0%。(3)利用大孔树脂CN205对野艾蒿提取液中的二咖啡酰奎尼酸进行分离纯化,可得到纯度为48.4%的二咖啡酰奎尼酸。葡聚糖凝胶进行二次纯化,二咖啡酰奎尼酸的纯度为82.3%。经制备色谱分离后,得到三种二咖啡酰奎尼酸单体。15 g野艾蒿经分离纯化后,可得到纯度均达到85%的1,5-二咖啡酰奎尼酸96.6 mg,3,5-二咖啡酰奎尼酸107.4mg,4,5-二咖啡酰奎尼酸61.4mg。(4)实验结果表明野艾蒿中黄酮量为1.33%,其中野黄芩苷量为0.59 mg/g。脉孢菌对野黄芩苷的微生物转化结果表明:固体发酵的脉孢菌酶液可有效转化野黄芩苷为野黄芩素,在55℃,pH 5.0,底物浓度2.0 mg/mL的条析下转化90 min,转化率为72.3%。(5)大孔树脂CN206对转化液中野黄芩素的分离纯化结果表明,分别用30%、50%的乙醇溶液对吸附饱和的树脂进行洗脱,可有效分离野黄芩素(主要存在于50%乙醇洗脱液中),纯化后野黄芩素的纯度达到90.0%。