近年来我国罗非鱼养殖业发展迅速，但罗非鱼相关疾病的爆发频繁发生，特别是链球菌病，给水产养殖业造成了巨大的经济损失。本研究主要针对无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）对中国罗非鱼养殖业造成巨大的危害情况，以制备的无乳链球菌灭活疫苗为研究对象，主要进行了无乳链球菌的分离鉴定及致病性分析、无乳链球菌培养条件的优化、无乳链球菌疫苗对吉富罗非鱼的免疫保护试验。试验从广东、广西、海南的罗非鱼主养区发病的罗非鱼体内分离出40株链球菌，通过传统方法及16SrRNA分子生物学方法相结合的手段对分离的致病性菌株进行鉴定，最终确定40株菌均为无乳链球菌，证明了无乳链球菌是华南地区罗非鱼链球菌病的主要病原。实验还选取6株具有区域代表性的菌株对罗非鱼进行了致病性分析，以研究不同地区的菌株之间毒力的差异，筛选具有较好免疫原性的菌株作为制备疫苗的候选菌株。结果显示，分离于广东湛江的无乳链球菌显示出较强的毒力，适合作为制备疫苗的候选菌株。针对无乳链球菌的培养与生长特性，本试验探讨了脑心浸液（Brian HeartInfusion，BHI）培养基的营养因子、初始pH值、溶氧、温度等因素对无乳链球菌生长的影响，并采用正交实验法对无乳链球菌培养基营养因子添加量进行优化，寻求无乳链球菌培养的最佳参数，以期为无乳链球菌疫苗的研制提供基础资料。结果表明，无乳链球菌生长的最适初始pH为7～8，培养温度为28～37℃，振荡转速为180～200rpm，在BHI培养基中添加2mg/mL的葡萄糖和20mg/mL的酵母粉即可在对数期获得最大细菌量。本研究采用注射和浸泡2种免疫方法，对用无乳链球菌临床分离株ZJ02福尔马林灭活制备的疫苗进行了免疫保护效果的研究。注射组以四个不同浓度的白油佐剂灭活疫苗免疫吉富罗非鱼；浸泡组以相同浓度的灭活疫苗分别与消旋山莨菪碱、脂肪醇聚氧乙烯醚和氯化钠三种不同佐剂免疫吉富罗非鱼。在免疫后的不同时间里对试验鱼进行尾静脉采血，测定罗非鱼血清中抗体效价水平、溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活力、过氧化氢酶活性和丙二醛含量。结果显示，无乳链球菌疫苗对罗非鱼具有较强的免疫原性，免疫组与对照组相比，血清中的抗体效价水平均显著性提高，注射组和浸泡组的抗体效价最高分别达到1:256和1:128；注射组中不同浓度的疫苗免疫组获得了较高的免疫保护率，高浓度组可达到95％；浸泡组中使用3种佐剂的免疫组免疫保护率分别为59％、64％、55％。免疫后罗非鱼血清中的抗体效价水平、溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活力、过氧化氢酶活性和丙二醛含量与对照组差异显著（P<0.05）。上述结果表明，无乳链球菌灭活疫苗对罗非鱼具有很好的免疫保护性，有效的提高了罗非鱼对无乳链球菌的免疫力，免疫剂量对注射免疫效果有显著性影响，不同免疫佐剂对浸泡免疫效果具有不同的免疫保护率。本研究旨在为无乳链球菌引起的鱼类疾病防治提供技术支撑。