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电化学免疫传感器的研制是当前分析化学研究的热点之一。电化学免疫传感器是一种将电化学分析方法和免疫技术相结合而发展起来的具有快速、灵敏、选择性高、操作简便等特点的生物传感器,已在临床医学、环境和食品工业等方面发挥了重要的作用。随着对生命中的微环境及组分的快速检测的需要,赋予了电化学免疫传感器更高的要求。
在电化学免疫传感器的研制过程中,非特异性吸附的影响是遇到的最大困难之一。非特异性吸附在多数情况下难以完全消除,其带来的信号叠加在分子间特异性结合的信号上,严重干扰正常的分析。实际样品中往往存在大量的基体蛋白(血清中含蛋白质~75 mg/mL),微量的吸附就会造成很大的偏差,使蛋白质直接分析几乎成为不可能。因此,研究有效抑制蛋白质非特异性吸附的方法,构建具有抑制蛋白质非特异性吸附的界面成为提高电化学免疫传感器准确度和检测灵敏度的关键问题。
本学位论文在国家自然科学基金(20575082,20805759)和广东省自然科学基金(7003714)的资助下,采用表面等离子共振(SPR)技术,利用双十二烷基二甲基溴化铵(DDAB)形成可移除保护膜构建抑制蛋白质非特异性吸附界面,并将其应用到可抛型电化学免疫传感器的研制,实现血清样品的直接测定。全文共3章,主要内容如下:
第1章:综述电化学免疫传感器及其发展趋势;综述SPR技术及其在免疫分析中的应用;综述铟锡氧化物导电玻璃(ITO)的研究应用进展。
第2章:建立了基于DDAB可移除膜抑制非特异性吸附的方法。利用巯基丙酸自组装单层膜固定抗原IgG分子,在其上制备可移除的DDAB双层磷脂膜。利用SPR技术研究该功能化膜抑制蛋白质非特异性吸附的效果。结果表明:当加入含有高浓度基体蛋白的anti-IgG-HRP样品进行免疫识别后,利用非离子型表面活性剂Triton X-100移除DDAB磷脂膜和其表面非特异性吸附蛋白,可有效抑制BSA、Hb等蛋白质分子的非特异性吸附,并且不影响抗原抗体间的特异性结合,而且,DDAB可移除膜膜还具有高的稳定性和重现性。该方法为实现高浓度基体蛋白共存下目标蛋白质的灵敏分析及相应电化学免疫传感器的研制奠定了良好的基础。
第3章:发展了可直接测定血清样品中IgG的可抛型电化学免疫传感器。利用光刻蚀技术研制了基于铟锡氧化物导电玻璃(ITO)的可抛型电极,通过电聚合邻氨基苯甲酸(o-ABA)固定抗原分子于该ITO电极表面,再覆盖DDAB双层磷脂膜。通过交流阻抗(EIS)技术表征了传感器制备过程,并采用计时电流法(CA)测定血清中的IgG。结果表明,该电化学免疫传感器可有效抑制血清中基体蛋白的非特异性吸附,检出限为5.97 nmol/L。