NMBR在妊娠小鼠子宫平滑肌的基因和蛋白表达谱及与分娩发动的关系探讨

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目的: 1.建立不同妊娠阶段小鼠子宫平滑肌中NMBR的基因及蛋白表达谱。 2.研究分娩前后妊娠小鼠子宫平滑肌组织中NF-κB的DNA结合活性、IL-6和HSP70的基因和蛋白的表达变化。 3.探讨NMBR-NF-κB-IL-6及HSP70的相关性及与分娩发动的关系。 方法: 1.建立孕龄准确的孕鼠模型,将其分为未孕、早孕、中孕、晚孕、产时、产后六个妊娠阶段。 2.应用半定量RT-PCR和Western blot技术检测不同妊娠阶段小鼠子宫平滑肌中NMBR和分娩前后平滑肌组织中IL-6及HSP70的mRNA及蛋白表达水平。 3.利用NoShiR转录因子分析法检测分娩前后妊娠小鼠子宫平滑肌组织中NF-κB-P65的DNA结合活性。 结果: 1.子宫平滑肌中NMBR的基因及蛋白表达谱1)NMBR在未孕、早孕、中孕、晚孕、产时及产后六组的mRNA相对表达量依次为0.09±0.23、0.07±0.16、0.36±0.29、0.17±0.28、0.56±0.35、0.09±0.18。产时组的表达高于其它各组,产时与未孕、早孕、晚孕、产后组比较差异有显著意义(P<0.05);产时虽高于中孕,但二者比较差异无显著性(P>0.05)。 2)NMBR在上述六组中的蛋白相对表达量依次为0、0.04±0.10、0.25±0.26、0.33±0.28、0.68±0.41、0。产时组表达显著高于其它各组(P<0.01)。 2.分娩前后妊娠小鼠子宫平滑肌组织中NF-κB-P65的DNA结合活性。 P65在未孕、晚孕、产时、产后组的DNA相对结合活性依次为0.17±0.09、0.16±0.03、0.24±0.04、0.19±0.03,产时组显著高于其他各组(P<0.05)。 3.分娩前后子宫平滑肌组织中IL-6mRNA、蛋白表达1)IL-6在未孕、晚孕、产时、产后各组的mRNA相对表达量依次为0.49±0.25、0.39±0.14、0.96±0.40、0.66±0.21,产时组表达显著高于其他各组(P<0.05)。 2)IL-6在上述各组中的蛋白相对表达量为0、0.15±0.16、0.11±0.15、0,晚孕和产时组显著高于未孕和产后(P<0.05),但产时与晚孕组比较无显著性差异(P>0.05)。 4.分娩前后子宫平滑肌组织中HPS70的mRNA及蛋白表达1)HSP70在未孕、晚孕、产时、产后各组的mRNA相对表达量依次为0.18±0.15、0.79±0.33、0.76±0.23、0.49±0.22。晚孕和产时组显著高于未孕和产后(P<0.05),产时与晚孕组比较无显著性差异(P>0.05)。 2)HPS70在以上4组的蛋白相对表达量依次为0.78+0.01、0.26±0.02、0.53±0.06、0.51±0.03,产时与产后组比晚孕组表达均明显升高(P<0.05),但产时与产后两组之间无差异显著性(P>O。05)。 5.分娩前后NMBR与NF-κB、IL-6及HSP70的相关性分析1)NMBR-NF-κB-IL-6的相关性分析①NMBR mRNA表达水平,P65的DNA结合活性与IL-6mRNA表达水平的相关性:P65的表达变化与NMBR的变化呈正相关(r=0.40,p<0.01);IL-6变化亦与NMBR呈正相关,(r=0.30,P<0.05);IL-6的变化与P65的变化也有明显的正相关(r=0.36,P<0.05)。再对三组变量进行偏相关分析得出:NMBR变化通过P65的变化影响了IL-6的变化,三者之间存在正相关。 ②NMBR蛋白表达水平,P65的DNA结合活性与IL-6蛋白表达水平的相关性:NMBR与P65变化无显著相关性(P>0.05);IL-6与NMBR变化呈正相关(r=0.36,P<0.05);P65与IL-6变化无相关性(P>0.05)。 2)NMBR-NF-κB-HSP70的相关性分析①NMBRmRNA表达水平,P65的DNA结合活性与HSP70mRNA表达水平的相关性:P65的变化与NMBR的表达变化呈正相关(r=0.40,P<0.01);HSP70的变化与NMBR的变化呈正相关(r=0.49,P<0.01);P65的变化与HSP70的变化无相关性(P>0.05)。 ②NMBR蛋白表达水平,P65的DNA结合活性与HSP70蛋白表达水平的相关性:NMBR-P65-HSP70变化之间均无相关性(P>0.05)。 结论: 1.NMBR的mRNA和蛋白表达随妊娠进展呈升高趋势,在分娩时达到最高峰,分娩后迅速降低,提示产时高表达NMBR可能参与子宫平滑肌收缩。 2.NF-κB介导的NMBR信号转导通过IL-6参与的炎症反应可能是子宫分娩发动的重要途径之一。 3.NMBR可能通过影响HSP70表达参与分娩发动,其调节可能不依赖于NF-κB-P65途径。
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