分泌表达黑曲霉糖化酶和木聚糖酶工业酒精酵母工程菌的构建

来源 :中国科学院微生物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiade522
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  本文用重叠延伸PCR方法从黑曲霉(Aspergillusniger)UV-11的基因组DNA中克隆出木聚糖酶xynB基因的cDNA序列,构建了由酵母乙醇脱氢酶(ADH1)启动子和终止子引导表达、木聚糖酶自身信号肽引导分泌、酵母rDNA序列介导的酵母整合型分泌表达质粒pAX2,利用糖化酶(A.nigerT21glucoamylase)表达质粒pKG1和木聚糖酶表达质粒pAX2构建了含双酶基因表达元件(分别由PGK启动子和ADH1启动子引导)的酵母YIp型表达质粒pNEW4。 本研究使用的转化方法对外源酶基因在工业用酒精酵母中的整合转化率为10/μgDNA(整合质粒);工程菌株XY2和GX11在固体培养基上连续传代10次以后进行PCR检测和酶活测定,结果表明两工程菌株的遗传稳定性较高。
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