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前言 目前，颈淋巴结转移和肿瘤局部复发是影响喉癌预后的最主要因素，就现有临床和影像学检测手段无法在术前准确判断颈淋巴结是否存在有微小转移病灶的现状，人们试图利用分子生物学手段，寻找可以判断肿瘤的转移潜力及影响转移的相关因子。 国内外学者已筛选出多种与肿瘤转移相关的特异基因，其中包括肿瘤转移促进基因和肿瘤转移抑制基因。 MTA1是新近发现的肿瘤转移促进基因，已经观察到这个基因的过表达与卵巢癌、直肠癌、胃癌、食道癌等肿瘤的侵袭和淋巴结转移相关。 nm23H1是研究较深入的肿瘤转移抑制基因，已在多种恶性肿瘤中发现nm23H1的低表达与转移及临床预后等呈负相关。但临床上也有相反的报告，有些肿瘤组织中的nm23基因表达水平缺失与肿瘤是否转移及临床预后无关，甚至有的肿瘤在其发生转移时nm23的表达反而增高，以上这些相互矛盾的结论，说明人们对nm23的认识还很不够，还需更深入的研究。 本实验应用半定量逆转录-聚合酶链式反应(semi-RT-PCR)技术，检测了喉癌组织和喉正常组织中的MTA1及nm23H1的mRNA表达情况，分别探讨二者与喉癌颈淋巴结转移的关系，旨在寻找可以较准确预测和早期诊断喉癌转移的生物学指标。 实验材料与方法 一、临床资料和分组 材料来源于中国医科大学第一临床学院耳鼻咽喉科2001年9月一2002年3月期间喉癌住院手术患者共48例。全部病例组织学类型均为鳞癌。奶4组：声门上癌淋巴结转移组历例，声门上癌无淋巴结转移组16例，声门癌（均无淋巴结转移）组历例，喉正常组织组（取自喉全切除术u 例。全组病例均行手术治疗，术前未接受放射治疗及化学治疗。术中切取新鲜离体癌组织癌灶中心非坏死部分，大小约 0．3 cm x 0．3 cm x 0．3 cm组织块。喉正常组织取自喉测除术安全缘（距癌组织边缘2 cm以上）以外。 二、试剂及仪器 逆转录试剂盒Super－script Tin（Promega，美国人引物序列：MTAI为 5’一 AGC—TAC—GAG—CAG—CAC—AAC—GGG—GT一 3’，5’一 CAC—GC T—TGG—’I’IT—CCG—AGA—GT—3’，Inn23 HI为 5’一 GCC—GG G—AGG—CAT一 m—TAA—TC一3’，5’一 AGG—GCA—GAC—CAC—Ah—GCT一 IT7’－C—3’，内对照p一肌动蛋白（p－achn）为5·－ACC－CCG－ACT－GAA－AAA—GAT—GA—3’，5’一 ATC—’ITC一 W—CCT—CCA一TGA－TC—3’（上海博亚生物技术有限公司 BIOASIA产品入 其它耗损材料均购自（omesa人 聚合酶链反应扩增仪：PI’n－200TM型（美国人 UVP自动凝胶图像分析系统 分析软件：Georks Intermediate 三、检测方法 本研究采用逆转录一聚合酶链反应（reverse rnscriphon polyme。e chain reaction，RT－PCR）方法，在相同条件下，通过8次实验，每附每组未检测的标本中任意取出2例，按声门上癌淋巴结转移组、声门上癌无淋巴结转移组、声门癌（均无淋巴结转移）组。喉正常组织组顺序进行实验，对每例标本都完成一次检测，得到全部64例标本的检测结果。每次实验分别提取各组织块的总RNA ·2·用逆转录酶将总 RNA的 mRNA逆转录为互补 DNA（compemen－my DNA，CDNA人用 MTAI和 nln23HI引物经 PCR方法放大合成DNA，再经凝胶电泳分离，乙醇固定，银染色，将显色的电泳带与标准DNA比较，确定MTAI和inn23HI是否表达＊ 四、结果判定 经RT－PCR方法检测后，在290hP处显带者为MTAI基因mRNA阳性，在185hp处显带者为nln23HI基因表达。 用UVP自动凝胶图像分析系统半定量测量Inn23 HI各区带的吸光度值＊值，曾称光密度 OD值人每例标本的相对A值一Inn23 HIA偷p－actin A值。 五、统计学方法 全部数据均用SPSS统计分析软件10．0版本迸行相关统计分析，采用 t检验方法对配对数据进行分析，P＜0．05认为有统计学意义。 实验结果 一、MTAI mRNA在喉癌中的表达 结果表明只在历例有颈淋巴结转移的声门上癌组中可以检测到MTAI mRNA（即阳性率为100％人无淋巴结转移的16例声门上癌组＊6例声门癌组和n例喉正常组织组中检测不到该基因的表达问3组阳性率均为0％人如图2（与图1实验同时进行L作为内对照的 P－achn为 540 bn在4组中均表达恒定。 二、run23 HllnRNA在喉癌中的表达 第一组癌组织标本中 Iun23HI相对 A值为 1．633 to．241，第二组癌组织标本中 nln23HI相对 A值为 1．502。0．298，第三组癌组织标本中Inn23 HI相对A值．为1．476＊0．339，第四组癌组织标本中 run23HI相对 A值为 1．9f刃 t 0．618，第二十三组癌组织标本 ·3·中 nzn23HI相对 A值为 1．489 0．296。第一组与第二组，第一组与第三组，第一组与第二十三组分别比较，结果均没有统计学意义（P＞o．05‘”‘P ＊．广’P＞o．广”）；第一组与第四组比较，结果有显著的统计学意义u