湖羊ZFY基因干扰载体及外泌体介导对性别控制的影响

来源 :石河子大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:goblinzehong
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动物的很多经济性状都受到性别的限制,比如产奶、产蛋性状等,再如产肉等性能对于不同的性别,动物的表现也不同,这时就需要对动物的性别来进行控制,随着生物工程领域的快速发展,人们逐渐摸索出一些动物的性别控制方法。通过性别控制技术,可以极大地提升经济效益,减少不必要的成本浪费如饲料成本,并且可以加快动物的育种进程。湖羊母羊具有繁殖率高,母性好,四季发情的特点,且其多产双羔,可利用该特性来与其他品种优良的公羊杂交获得大量后代,故对于湖羊,我们更期望产出后代为雌性。所以本试验利用了RNAi技术对湖羊Zfy基因进行干扰沉默,从而控制后代性别。目的:本试验拟通过睾丸注射Zfy基因外泌体干扰载体,观察湖羊后代性别比例,探究外泌体作为Zfy基因干扰片段的载体的可行性,为性别控制方法提供一个新的选择方法。方法:(1)无菌采取湖羊血样,用试剂盒法提取、提纯外泌体。(2)构建5种湖羊Zfy基因外泌体干扰载体,分组进行细胞水平的干扰试验,通过q RT-PCR检测Zfy基因m RNA表达量变化。(3)使用细胞水平试验效果最好的C组进行睾丸注射,设对照组注射p LL3.7-C,待母羊产羔后统计分析后代性别比例。结果:(1)在细胞水平试验中,有两组外泌体干扰载体显著地抑制了Zfy基因的表达,最好的效果表达水平降低了32.6%。(2)试验组母羔率为56.6%,对照组为68.6%,试验组显著低于对照组;试验组母羔平均初生重为2.81±1.153 kg,公羔为3.01±1.021 kg,对照组母羔平均初生重为2.81±1.247 kg,公羔为3.00±1.174 kg,两组差异不显著。结论:成功构建了湖羊Zfy基因干扰载体,对Zfy基因产生了显著干扰效果,但在动物水平进行干扰试验却没有取得预期结果,分析其原因:1.外泌体载体包封率有限且本身不能进行复制导致注射睾丸的有效剂量较小;2.由于外泌体保存不当影响最终结果。
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