本文对PTEN、Akt和Trx的结构功能以及在胰岛素分泌中的关系进行了阐述，构建了PTEN、Akt和Trx基因的相关质粒，检测了Trx在细胞中mRNA水平的表达。这为研究ROS刺激下的胰岛素分泌的分子机制提供了实验材料和检测方法。主要研究内容如下：　　 ⑴用RT-PCR法，从大鼠肝组织中提取总mRNA、合成cDNA并扩增Trx基因，定向克隆到表达质粒pcDNA3.0中，构建pcDNA3.0-Trx重组质粒，然后用PCR、酶切、电泳和DNA测序鉴定，　　 ⑵六孔板中，脂质体介导pcDNA3.0-Trx和pcDNA3.0转染NIH 3T3成纤维细胞各两孔，再用终浓度50 μΜ H2O2刺激未转染任何质粒、转染过pcDNA3.0和pcDNA3.0-Trx的各一孔，剩余一孔未转染也未刺激的作为对照。用RT-PCR法，从上述NIH 3T3成纤维细胞中提取总mRNA并逆转录为cDNA，以较纯的一样品依次倍比稀释10-1-10-5作为标准品，建立检测18s mRNA的标准曲线。　　 ⑶实时荧光定量PCR仪上测出以上六种状态 Trx和18s的CT值，用2-△△ CT法分析Trx基因mRNA水平表达情况，测得终浓度50 μΜ H2O2刺激的细胞中Trx基因mRNA表达水平上确有提高。　　 ⑷以pTRE-WT-PTEN、pTRE-G129R-PTEN、pTRE-G129E-PTEN质粒中相应PTEN为模板，用PCR技术得到野生型PTEN、G129R突变型PTEN、G129E突变型PTEN、反义PTEN，并定向亚克隆到表达质粒pcDNA3.0上。　　 ⑸以pcDNA3.0-WT-PTEN为模板，用Pfu酶定点突变试剂盒PCR扩增得到pcDNA3.0-C124S-PTEN质粒。构建的所有这些真核表达质粒测序后，同GenBank中收录的对比正确。将探讨各自的功能以及在胰岛素分泌分子机制中的作用。