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三叶虫茶是用三叶海棠叶饲喂米缟螟Aglossa dimidiata幼虫,然后取其排泄物作药用或茶用的一种茶。明代李时珍著《本草纲目》等许多学术专著对虫茶均有记载,喝虫茶不仅清凉甘美,而且有很好的医疗作用,能降血压,对溃疡性结肠炎有较好疗效。
为进一步确定其有效成分和提供质量控制的方法,本实验应用色谱法分离纯化三叶虫中的白杨素苷及其苷元,并进行了结构鉴定和含量测定;同时建立了不同虫龄米缟螟所产三叶虫茶的HPLC指纹图谱。
1.应用聚酰胺柱色谱分离三叶虫茶80%丙酮提取物,用不同浓度的乙醇洗脱,分离得到白杨素苷,并用化学鉴别、UV、IR、HPLC-MS、NMR 等对其结构进行了鉴定。
2.分别以HPLC建立了三叶虫茶中的白杨素苷和白杨素含量检测方法,并进行方法学考察;结果显示三叶虫茶和三叶海棠中白杨素苷的含量分别为2.44%(n = 5,RSD = 1.8%),5.08%(n = 3,RSD = 1.0%),且白杨素苷具有较宽的线性范围0.2~20μg·mL-1,r = 0.9996, 该法测定结果准确、重现性好。
3.通过正交试验优选了三叶虫茶中白杨素苷的提取工艺,确定最佳的提取工艺为加20倍的80% 丙酮溶液,于65℃下提取两次,每次75 min;通过测定白杨素苷在不同醇浓度下的平衡常数和聚酰胺的吸附量,寻找其洗脱规律。
4.建立不同虫龄所产叶虫茶的HPLC指纹图谱,所建立的指纹图谱整体分离度良好,方法的重现性,稳定性,各样品的非共有峰比例,保留时间的RSD值,相似度都符合指纹图谱的要求。
5.采用酸性染料比色法和雷氏铵盐法测定虫茶和海棠叶中的总生物碱,结果都显示海棠叶中总生物碱的含量约是虫茶中的四倍,对测定方法进行了系统的方法学考察, 方法重现性好,准确度高。