【摘 要】
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目的:探讨24p3/NGAL基因介导的铁转运对缺氧诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法:(1)用分子克隆的方法构建PcDNA3.1/24p3质粒,采用脂质体转染的方法瞬时转染小鼠胚胎成纤维
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目的:探讨24p3/NGAL基因介导的铁转运对缺氧诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法:(1)用分子克隆的方法构建PcDNA3.1/24p3质粒,采用脂质体转染的方法瞬时转染小鼠胚胎成纤维(NIH/3T3)细胞;(2)实时荧光定量PCR验证24p3在NIH/3T3细胞中基因水平的表达,ELISA验证24p3在NIH/3T3细胞中的蛋白水平的表达,(3)以未转染质粒的空白组和转染空载体质粒组作为对照,RT-PCR检测各组细胞24p3mRNA水平,ELISA检测各组细胞培养上清中24p3水平,收集各组上清液;(4)用氯化钴缺氧诱导小鼠肾小管上皮(TCMK-1)细胞,用收集的NIH/3T3细胞上清液在正常铁离子浓度下培养,流式细胞仪检测各组TCMK-1细胞凋亡情况。结果:(1)转染PcDNA3.1/24p3质粒后的NIH/3T3细胞24p3mRNA和蛋白表达水平明显增加,证实转染成功;(2)与对照组相比,加入重组质粒转染组上清液的TCMK-1组凋亡细胞数量明显减少(P<0.05)。结论:24p3/NGAL介导的铁转运可抑制缺氧状态下肾小管上皮细胞的凋亡,可能对急性肾损伤肾小管上皮细胞具有一定的保护作用。
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