目的:T细胞淋巴瘤(TCL)是来源于T细胞的恶性克隆增殖性疾病,占所有淋巴瘤的12%~15%。其病理类型繁杂,是一种侵袭性较强,生物学行为及临床表现具有明显异质性的一类恶性淋巴肿瘤。该病另一重要特点是其发病率具有明显的种族及地区差异性,在HTLV-1流行的亚洲国家发病率更高。而大多数TCL对传统的经典治疗方案疗效较差。临床上亟需寻找到新的治疗方法。EZH2蛋白是重要的组蛋白甲基转移酶分子,依靠其高度保守的SET结构域可以甲基化H3K27,三甲基化的H3K27可以将PRC1复合物招募到特定的基因位点,沉默与细胞分化、抑制增殖在内的基因,导致肿瘤的发生。前期免疫组化显示TCL组织中EZH2高表达。所以本实验旨在通过慢病毒介导的EZH2-sh RNA及EZH2抑制剂UNC1999处理hut78细胞系,观察EZH2对细胞增殖、凋亡的影响;及与化疗联合后的协同增敏作用。为EZH2抑制剂应用到临床治疗中提供理论基础。同时,从凋亡、耐药及粘附转移三方面探讨EZH2的相关调控机制。方法:1.利用慢病毒介导的EZH2-sh RNA转染人T细胞淋巴瘤hut78构建EZH2下调的单克隆细胞系,在RT-q PCR和Western-blot进行验证的基础上,采用MTS、Brdu、流式检测靶基因EZH2下调后对Hut78细胞增殖凋亡的影响。2.采用多种临床常用化疗药物(阿霉素、环磷酰胺、长春新碱、顺铂、氟达拉滨、地塞米松)梯度处理hut78、hut78 control及hut78 EZH2-sh RNA,利用MTS检测化疗药物对三种细胞系细胞增殖的影响。3.采用EZH2小分子抑制剂UNC1999梯度处理hut78,MTS检测其对hut78细胞增殖抑制情况。同时联合化疗药物梯度处理hut78,观察化疗增敏情况。4.采用RT-q PCR或Western-blot方法,从细胞凋亡及细胞耐药、转移角度检测EZH2下调后相关分子表达情况变化。结果:1.采用EZH2-sh RNA下调hut78细胞EZH2的表达水平后,MTS检测显示:hut78出现明显的增殖抑制,抑制率达46.8%。2.采用不同化疗药物分别处理hut78、hut78 EZH2-sh RNA细胞,后者抑制率明显增加,药物的IC50值下降,二者具有统计学差异(P<0.05)。3.采用EZH2抑制剂梯度处理hut78细胞,hut78出现明显的增殖抑制性,呈显著的时间及浓度依赖性。4.采用EZH2抑制剂联合化疗药物处理hut78,明显增加了化疗药物的增殖抑制性,Q值分析显示EZH2抑制剂对化疗药物具有协同增敏作用(q>1.15)。5.检测hut78、hut78 EZH2-sh RNA及EZH2抑制剂处理后的hut78三种细胞系中主要凋亡分子(P53、Bcl-2)、耐药分子(LRP、MDR-1、MRP-1)及细胞转移粘附分子(VCAM、ICAM)的表达情况,RQ值(相对表达量)具有差异性,(P<0.05)。结论:1.采用EZH2-sh RNA转染hut78及利用EZH2抑制剂处理hut78细胞系后,可引起hut78中EZH2的表达下降。2.EZH2的下调可明显抑制肿瘤细胞的增殖。3.EZH2的下调可增加hut78对化疗药物的敏感性,EZH2抑制剂与化疗药物之间具有协同作用。4.EZH2下调可引起细胞凋亡、耐药及转移粘附分子的表达异常,提示EZH2具有广泛的调控作用,对肿瘤的发生、耐药及转移中发挥作用。