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目的Toll样受体3(TLR3)是Toll样受体家族的一员,通过识别病原相关分子模式(PAMPs)来激活固有性免疫系统。近来研究表明,人工合成dsRNA可以通过受体非特异性激活TLR3/干扰素通路,抑制血管生成和肿瘤细胞增殖。这一发现表明TLR3通路的激活具有抗癌潜力。在本研究中,我们将TLR3激动剂(sRNA与索拉菲尼联合应用,在体内外研究其抑制肝癌的作用。方法首先在100例人体肝癌组织中通过免疫组织化学法分别检测TLR3和NF-κB的表达；然后在肝癌细胞中从设计的4种dsRNA中筛选出激活TLR3效果最好的dsRNA (BM-06)用于后续实验：通过核浆分离实验检测NF-κB的活性,间接反应dsRNA激活TLR3的效果：体内外实验分五组,BM-06与索拉菲尼单独或联合应用组、应用poly(I:C)作为阳性对照组和未处理对照组,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移能力,CCK-8法检测细胞增殖能力,qRT-PCR和Western blot检测细胞HBsAg和HBcAg的表达：通过2-AAF诱发大鼠原位肝癌模型,观察用BM-06和索拉菲尼分别或联合处理后对肿瘤生长的影响,免疫组织化学检测鼠肝癌组织中Laminin、PCNA、survivin和bcl-2的表达。结果人肝癌组织有TLR3和NF-κB的表达,阳性表达率分别为64%和57%;BM-06处理HepG2.2.15细胞后与未处理对照组比较NF-κB从胞浆转移至胞核,表明BM-06具有激活TLR3的作用；HepG2.2.15细胞在BM-06和索拉菲尼单独或联合处坪后,其凋亡北显著增高(各组F=1.106、1.040、1.811、1.800),迁移能力下降(各组F=1.160、1.800、1.400、1.800),增殖明显降低(72h F=4.025、1.088、2.966、2.102)(均P<0.05),以BM-06+索拉菲尼组效果最好：BM-06处理后HepG2.2.15细胞HBsAg和HBcAg蛋白表达水平(分别为0.30±0.02,0.41±0.03)较未处理组(分别为0.76±0.07,0.73±0.05)显著下降,差异具有统计学意义(HBsAg:F-2.069, HBcAg:F=2.203, P<0.05);体内结果显示抑制大鼠肝癌生长,BM-06+索拉菲尼组、BM-06组、索拉菲尼组和poly(I:C)组肝重体重比(分别为3.82±0.25、4.40±0.12、4.16±0.13和4.51±0.21)与未处理对照组(5.31±0.28)比较,差异有统计学意义(F=2.626、1.103、2.944、2.860,P<0.05),并处理组癌组织中Laminin表达表示癌结节直径分别为(0.81±0.02mm2、1.21±0.03mm2、1.02±0.04mm2和1.63±0.04mm2)显著小于未处理组(3.23±0.03mm2)(F=2.308、2.681、2.160、2.160,P<0.05)。细胞增殖PCNA各组表达率分别为(7.43%±1.31%、16.81%±2.27%、12.50%±1.19%和18.13%±1.39%)低于对照组(24.64%±2.28%),bcl-2各组表达率分别为(30.13%±2.42%、49.82%±3.53%、38.55%±3.47%和65.14%±4.58%)低于对照组(81.83%±5.45%),survivin各组表达率分别为(22.11%±2.29%、30.54%±3.31%、29.73%±2.43%和42.15%±3.38%)低于对照组(71.82%±4.44%),差异均具有统计学意义(PCNA:F=2.536、1.550、1.715、2.579,bcl-2:F=1.399、1.293、1.161、1.412, survivin:F=1.128、2.243、1.964、1.276,P<0.05),其中Laminin、bcl-2和survivin的表达BM-06组与poly(I:C)组比较差异也具有统计学意义(Laminin:F=2.050, bcl-2: F=2.010, survivin:F=1.014, P<0.05),表明BM-06在抑制肝癌生长、促进肝癌细胞凋亡方面优于poly (I:C)。结论1.人肝癌组织有TLR3和NF-κB的表达。2.本文研究的TLR3激动剂dsRNA (BM-06)能有效激活HepG2.2.15细胞和大鼠原发性肝癌中的TLR3进而激活NF-κB。3. BM-06通过TLR3途径有效抑制体内外肝癌细胞的增殖和侵袭,促进细胞凋亡,还能抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBcAg。4. BM-06能显著增强索拉菲尼的抑癌作用,两者联合使用的加合作用提示BM-06有可能成为索拉菲尼的有效佐剂。5.本文研发的BM-06抑癌作用优于poly(I:C),表明激活TLR3具有序列特异性。