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香蕉枯萎病是由镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)引起的维管束病害,对我国广东和海南的香蕉种植业造成了严重的威胁。迄今为止仍无有效的防治方法,由于是土传性病害,所以杀菌剂很难起作用。近年来对生物防治有较多的研究,但是生防菌在土壤中的定殖能力不稳定,成为生物防治中的难点。本论文着重研究了适合木霉生防菌株生长、繁殖的条件,筛选了对病原菌起抑制作用而不影响木霉生防菌株生长的杀菌剂。这类杀菌剂可作为木霉生防菌剂的辅助剂,在生产过程中适量添加以增强木霉生防菌株在土壤中的竞争能力达到提高防效的目的。
本研究筛选的药剂中,初步认为恶霉灵300 mg/L的浓度可以作为Th菌株的辅剂添加,而其他菌株在此浓度下不论生长还是产孢都受到一定的抑制;T044菌株在咪鲜胺浓度为0.01 mg/L的条件下产孢与对照没有差异,因此可考虑作为T044菌株的辅剂;多菌灵0.01 mg/L可作为T1菌株的辅剂。实验结果表明不同的木霉生防菌株对不同杀菌剂及其不同浓度的耐药性是不同的,选择合适的杀菌剂及浓度可有利于木霉生防菌株的生长繁殖。
T1菌株在基本培养基生长良好,其中果糖和葡萄糖为最佳碳源,蛋白胨和天冬酰胺为菌丝生长的最佳氮源,而NaNO3最利于其产孢。不同的维生素对生长及产孢影响不同,VB1+VB6和VH对菌丝生长和产孢最有利。各种微量元素都可以促进T1菌株的生长和产孢,其中以锰效果最明显。T1菌株孢子萌发很快,在PDA膜上12h即可全部萌发,最佳萌发温度30℃~35℃,最佳湿度80%~90%,最佳pH3~7,光照不利于孢子的萌发。
本研究还进行了木霉菌株发酵培养料的筛选,结果显示,麸皮和玉米秸秆是T1菌株的最佳培养料,培养5d孢子的产生量达到109个/g。麸皮木屑比例为2:1时产孢量达到8.981×109个/g,大于麸皮和玉米秆加糖处理的两次产孢量之和,也大于任一培养料单独培养时的产孢量。木屑可以使培养料疏松,能在培养过程中增加通气性,从而增加木霉的孢子产量。
木霉T1菌株分生孢子储藏实验表明,木霉分生孢子的萌发率随保存时间的延长而降低。在不同的储藏温度下萌发率降低的程度不同,其中在4℃条件下储藏的孢子萌发率降低最缓慢,保存240 d萌发率降为38.459%。经—20℃低温储藏的孢子显示处于休眠状态,不会在短时间内迅速萌发。木霉分生孢子的萌发率在室温条件下降低的最快,开始室温储藏实验是六月中旬,当时的室温超过30℃,保存30 d后检查其萌发率就降低到一半以下。这表明木霉的分生孢子在低温下能储藏较长的时间。