冬虫夏草是是一种极其名贵的药用真菌。由于其自身特性和特殊的生长环境,导致自然资源十分稀少,乱采滥挖的现象更加剧了资源匮乏,而市场需求却不断增加,因此寻找合适的替代品成为研究的重点。广东东阳光有限公司经过10年的研发实现了冬虫夏草的产业化繁育技术。该技术所培育的冬虫夏草水提液经过鉴定有着不低于野生冬虫夏草的理化特性,说明冬虫夏草水提液有成为野生冬虫夏草替代品的可能。首先,本课题组对冬虫夏草水提液体外抗肿瘤作用和体内联合顺铂(DDP)用药对Lewis移植小鼠模型增效减毒的作用进行研究。其次,本课题组对AECS和DDP联合用药增效减毒作用机制进行研究。最后,在斑马鱼模型中进一步探究联合用药的增效减毒性作用。结果发现,冬虫夏草水提液在体外对多种肿瘤细胞具有显著的抗肿瘤作用。AECS通过抑制肿瘤生长从而提高DDP抗肿瘤活性,延长了小鼠生存时间,并减轻由于DDP引起Lewis移植瘤模型肝肾毒性作用,同时在Lewis移植瘤模型中发现伴随着NFκB和AKT/MMP2/MMP9通路的减弱。此外,在A549移植瘤斑马鱼模型中,与DDP组比较,联合治疗组也减轻了由于化疗药物引起的斑马鱼毒性。这些结果表明,AECS与DDP联合用药是一种可以提高以DDP为基础的化疗疗效并且能够减少由于DDP治疗引起肝肾毒性的新型治疗方式,可能与抑制NF-κB/IκBα和AKT/MMP2/MMP9通路有关。为了研究冬虫夏草水提液体外抗肿瘤作用机制。首先对肿瘤细胞增殖的影响进行研究,通过MTT法检测冬虫夏草水提液对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖能力的影响;克隆形成实验检测其对A375细胞克隆形成能力的影响;流式细胞仪检测冬虫夏草水提液对人恶性黑色素瘤A375细胞周期分布的影响。然后对恶性黑色素瘤细胞的侵袭迁移能力的影响进行探究。通过划痕实验检测冬虫夏草水提液对A375细胞迁移能力的影响;通过黏附实验检测对A375细胞黏附能力的影响;transwell小室实验检测对A375细胞迁移和侵袭能力的影响;采用western blot法检测对A375细胞中MMP-2、p-AKT、MMP-9、Bcl-2、Bax、CyclinE、CDK2及CDK4蛋白表达的影响。结果发现冬虫夏草水提液能够显著抑制A375细胞的增殖和克隆形成的能力,并且可以将A375细胞阻滞在S期。而划痕实验和transwell实验结果则说明冬虫夏草水提液对A375细胞的迁移和侵袭能力有抑制作用,黏附实验结果说明A375细胞黏附能力受冬虫夏草水提液影响。Western blot 结果显示 MMP-9、p-AKT、MMP-2、Bcl-2、CyclinE、CDK2、CDK4蛋白表达减少;Bax、P21蛋白表达增加。以上结果说明冬虫夏草水提液能显著抑制恶性黑色素瘤A375细胞的增殖及侵袭迁移能力,其作用机制可能与阻滞细胞周期调控周期相关蛋白、激活AKT/MMP-2/MMP-9通路及调控MMPs家族蛋白及p-AKT蛋白的表达有关。