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本研究采用RACE技术对药用植物绞股蓝法呢基焦磷酸合酶(FPS)基因进行克隆分离，并在此基础上对该酶进行原核表达。主要研究结果如下:
(1)获得绞股蓝FPS基因全长cDNA序列。使用TaKaRa公司3FullRACECoreSetVer2.0、5FullRACEKit两个试剂盒，经3RACE及5RACE克隆后拼接，获得绞股蓝FPS基因全长cDNA序列1288bp，包含一个1029核苷酸的开放读框，编码342个氨基酸残基，推断该蛋白的相对分子质量为3.94×104。NCBIBlast结果显示绞股蓝FPS基因编码蛋白的氨基酸序列与已知的植物FPS氨基酸序列的同源性为91％～74％，核酸序列的同源性为88％～78％。系统树分析发现绞股蓝FPS与罗汉果、黄瓜的亲缘关系最近，这证实了葫芦科植物FPS基因的同源性，与预期结果相符。同时还发现绞股蓝、罗汉果、黄瓜与苹果FPS的亲缘关系也较近，但根据NCBI采纳的植物分类表，葫芦科属于葫芦目，苹果则属于蔷薇目蔷薇科，进化上葫芦科植物与蔷薇科处于不同的分支，有可能是一个FPS基因进化的分支点。
(2)绞股蓝FPS的原核表达。在经人工拼接得到绞股蓝FPS基因全长cDNA序列后，重新设计引物，克隆绞股蓝FPS基因cDNA全长;将FPS基因cDNA读码框架序列与表达载体pET32a(+)连接，成功构建pET32a(+)/FPS表达重组质粒，并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出约54KD的目的融合蛋白。
本研究利用RACE技术克隆绞股蓝FPS基因并对该基因进行原核表达，为深入了解绞股蓝三萜类生物合成途径及其分子调控机制、该酶的分离纯化，活性研究及分子进化研究方面具有重要意义。
(1)获得绞股蓝FPS基因全长cDNA序列。使用TaKaRa公司3FullRACECoreSetVer2.0、5FullRACEKit两个试剂盒，经3RACE及5RACE克隆后拼接，获得绞股蓝FPS基因全长cDNA序列1288bp，包含一个1029核苷酸的开放读框，编码342个氨基酸残基，推断该蛋白的相对分子质量为3.94×104。NCBIBlast结果显示绞股蓝FPS基因编码蛋白的氨基酸序列与已知的植物FPS氨基酸序列的同源性为91％～74％，核酸序列的同源性为88％～78％。系统树分析发现绞股蓝FPS与罗汉果、黄瓜的亲缘关系最近，这证实了葫芦科植物FPS基因的同源性，与预期结果相符。同时还发现绞股蓝、罗汉果、黄瓜与苹果FPS的亲缘关系也较近，但根据NCBI采纳的植物分类表，葫芦科属于葫芦目，苹果则属于蔷薇目蔷薇科，进化上葫芦科植物与蔷薇科处于不同的分支，有可能是一个FPS基因进化的分支点。
(2)绞股蓝FPS的原核表达。在经人工拼接得到绞股蓝FPS基因全长cDNA序列后，重新设计引物，克隆绞股蓝FPS基因cDNA全长;将FPS基因cDNA读码框架序列与表达载体pET32a(+)连接，成功构建pET32a(+)/FPS表达重组质粒，并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出约54KD的目的融合蛋白。
本研究利用RACE技术克隆绞股蓝FPS基因并对该基因进行原核表达，为深入了解绞股蓝三萜类生物合成途径及其分子调控机制、该酶的分离纯化，活性研究及分子进化研究方面具有重要意义。