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目的:提取分离生姜总姜酚、总黄酮,并对其进行含量测定以及PC12细胞的损伤抑制研究,为生姜抗脑缺血有效部位的深入研究奠定基础。方法:1.采用75%乙醇,按1:3(m:v)比例对生姜中的主要成分进行提取。提取物以甲醇溶解除杂,浓缩甲醇溶出物得浸膏。以聚酰胺为柱层析材料,以不同浓度乙醇-水溶液为洗脱剂,对生姜浸膏进行分离。采用硅胶G板,以石油醚-乙酸乙酯(7:3)为展开剂,5%盐酸酸性三氯化铁乙醇溶液和三氯化铝乙醇溶液为显色剂进行薄层(TLC)检测,50%乙醇洗脱部分为姜酚类化合物,减压蒸干得总姜酚干膏;95%乙醇洗脱部分减压蒸干得总黄酮干膏,并用紫外分光光度法对生姜总黄酮进行含量测定。以石油醚-乙酸乙酯(7:3)为洗脱剂,以硅胶为柱层析填料对总姜酚进行粗分;以6-姜酚、8-姜酚为对照品,分别吸取洗脱液5-10μl,点于硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯(7:3)、氯仿-甲醇(9:0.5)为展开剂,5%盐酸酸性三氯化铁乙醇溶液显色;根据TLC检测结果合并洗脱液,浓缩蒸干。采用制备型高效液相(Prep-HPLC),色谱条件:C18ODBTM10um色谱柱(30mm×150mm);流量15ml/min;检测波长:280nm、370nm;进样量3-5ml;流动相:甲醇-水(65:35),对总黄酮进行分离纯化得到单体化合物。2.采用H2O2造成PC12细胞损伤模型,通过倒置显微镜观察细胞的形态,MTT法测定了解PC12细胞损伤情况和存活率,研究6-姜酚、8-姜酚、总姜酚、总黄酮和对照品的细胞保护作用;结果:1.共提取生姜27.06 kg,得生姜75%乙醇提取物干膏0.8kg,提取率为2.96%。取500g生姜75%乙醇提取物,分离得到总姜酚126.0g,得率为25.2%。从总姜酚分离出6-姜酚,8-姜酚两个单体化合物。以芦丁为对照品,测得生姜总黄酮提取物中黄酮类化合物含量为12.86%,加样回收实验RSD值为1.86%。分离得生姜黄酮Ⅰ(929.5mg),化合物2(40.6mg)。以生姜黄酮Ⅰ为对照品,以高效液相色谱法测得生姜总黄酮中黄酮Ⅰ的含量为0.79%。2.与损伤组比较,6-姜酚1μM、10μM;总姜酚10μM;总黄酮(0.01-0.5μg/L)可明显提高A570OD值,显著提高PC12细胞生存率(P﹤0.05 or P﹤0.01)。8-姜酚的A570OD值与损伤组比较无显著差异,无统计学意义。结论:1.以该提取方法提取生姜总姜酚和总黄酮,操作简便,结果准确可靠,为进一步研究生姜中总姜酚和总黄酮的提取工艺提供理论依据。2.6-姜酚1μM、10μM,总姜酚10μM和总黄酮(0.01-0.5μg/L)对H2O2损伤的PC12细胞具有明显的保护作用。