1985年,澳大利亚学者Burns G教授以混合淋巴细胞培养(Mixed Lymphocyte Culture,MLC)中活化的淋巴细胞作为免疫原免疫小鼠制备抗活化T细胞表面抗原的单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),筛选得到一株可特异性识别表达于活化T细胞表面膜分子的mAb,将其命名为LeoA1。随后,发现LeoA1 mAb识别的分子亦高水平表达在血小板表面,遂将此分子命名为血小板与T细胞活化抗原1(platelet and T cell activation antigen 1,PTA1)。在2000年第七届国际人类白细胞分化抗原协作组(HLDA7)大会上,由我室提交的抗PTA1 mAb和由DNAX研究所提交的抗DNAM-1mAb获准了新的CD编号-CD226,这是首次以我国实验室为主要研究单位获得的新CD分子命名。CD226分子属于免疫球蛋白超家族成员,胞膜外区含有2个V样结构域,分子量约为65k D,主要表达于T细胞、NK细胞、NKT细胞、巨核/血小板谱系、血管内皮细胞、B细胞亚群和部分造血干细胞。2003年,人CD226分子的两种配体鉴定成功,分别是人脊髓灰质炎病毒受体(PVR/CD155)和CD112。CD226分子与其配体的相互作用参与T细胞的分化和活化、NK细胞对肿瘤细胞和病毒感染细胞的杀伤、单核/巨噬细胞与内皮细胞的粘附、巨噬细胞的分化和血小板的活化与聚集等,与自身免疫性疾病、移植物抗宿主反应以及病毒感染等疾病关系密切。我们前期实验发现,CD226 mAb LeoA1能够调控人MLC培养上清中细胞因子的表达。由于MLC体系是一个多细胞培养体系,而IL-10是一个可以由多种免疫细胞合成和分泌的抑制性细胞因子(如参与固有免疫应答的树突状细胞、巨噬细胞、肥大细胞和NK细胞;参与适应性免疫应答的Th1、Th2、Th17、Treg、CD8+T细胞和B细胞),因此搞清CD226分子影响MLC体系中IL-10分泌的细胞机制十分必要;另一方面,作为具有重要免疫调节功能的细胞因子,IL-10在机体免疫应答的各阶段以及多个部位调节机体的免疫应答强度,进而参与多种疾病的发生和发展,因此进一步观测CD226分子和IL-10在临床疾病中的作用及其机制有助于深入理解CD226分子的功能。鉴于此,本课题围绕CD226分子展开研究,获得了以下的研究结果:(1)在本实验室前期发现CD226 mAb LeoA1可以调控MLC体系中细胞因子分泌格局的基础上,我们观测了LeoA1在MLC体系中上调IL-10表达的细胞机制,发现LeoA1作用于MLC体系24 h时,CD4+IL-10+T细胞的比例与对照组相比显著升高,而CD14+IL-10+细胞、CD19+IL-10+细胞、CD56+CD16+IL-10+细胞、CD11c+HLA-DR+IL-10+细胞与对照组相比无显著性差异,提示LeoA1促进CD4+IL-10+T细胞的分化;进一步分别去除PBMC中的单核细胞、CD4+T细胞或B细胞亚群,发现分别去除单核细胞和CD4+T细胞后,MLC体系中IL-10的表达水平显著降低,提示单核细胞和CD4+T细胞参与LeoA1促进MLC体系中IL-10的分泌。(2)在应用WT小鼠和Cd226-/-小鼠成功建立小鼠EAE模型的基础上,我们发现Cd226-/-小鼠EAE发病时间比WT小鼠延迟且EAE严重程度减弱;腰髓组织HE染色结果显示,Cd226-/-小鼠在EAE发病高峰期时腰髓组织中炎性细胞的浸润减少;ELISA检测血清中细胞因子水平时,发现Cd226-/-小鼠在EAE发病高峰期体内血清中IL-10表达水平较WT小鼠高。(3)在收集了120名肺癌患者和83名健康志愿者的外周血标本基础上,我们通过提取全基因组DNA并运用PCR-RFLP方法结合统计分析研究人群中CD226单核苷酸多态性位点Gly307Ser(rs763361)与肺癌易感性的关联。结果发现,在非吸烟组人群中,肺癌人群中TT基因型的比例显著高于健康对照组,OR值为3.4846,95%CI为1.1932-10.1762,P值为0.0224。女性肺癌人群中TT基因型的比例(35.14%)与健康人群(14.29%)相比无显著性差异,但P值为0.0610,提示CD226 rs763361 TT基因型可能与女性人群肺癌的易感性相关。