论文部分内容阅读
研究目的和内容：乳腺癌是一种激素依赖性肿瘤,雌激素受体(estrogen receptor, ER)、孕激素受体(progesterone receptor, PR)水平的检测已成为临床实验室中乳腺癌患者的常规检测项目。近年来研究发现雄激素受体(androgen receptor, AR)对估计乳腺癌的恶性程度、预后及内分泌治疗有一定价值。有文献报道乳腺癌的发生发展、转移和抗药与一些内源性microRNA有关。而AR的转录活性也调节一些microRNA的表达,提示AR的结构性活化可能通过microRNA变化而改变细胞内的基因表达程序,这正是细胞癌变和癌细胞行为的分子基础。本研究首先分析乳腺癌组织雄激素受体AR的表达,并分析其与临床病理、生物学特征的关系,及在各分子亚型中表达的特点。进一步观察雄激素二氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)刺激对ER阳性和ER阴性乳腺癌细胞系的生物学效应。分析乳腺癌细胞的microRNA表达在雄激素刺激前后的变化,以筛选出AR活化相关的microRNA。方法：1应用免疫组化方法分析乳腺癌石蜡包埋组织中雄激素受体的表达,并结合随访情况,分析AR蛋白表达与肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移、ER、PR、CerBb-2等主要临床病理学特征间的关系。并分析AR表达在乳腺癌不同分子亚型中的特点。2选择ER阳性的MCF-7和ER阴性的MDA-MB-453乳腺癌细胞,体外培养,通过Western blot技术检测乳腺癌细胞中AR蛋白表达情况。3采用MTT法检测雄激素DHT对ER阳性和ER阴性两个不同的人乳腺癌细胞系生长增殖的影响。4应用流式细胞术检测DHT刺激乳腺癌细胞前后细胞周期的变化。5采用microRNA芯片杂交技术,筛选出MCF-7和MDA-MB-453乳腺癌细胞系经DHT作用后明显上调和明显下调的microRNA。6实时定量RT-PCR (Realtime RT-PCR)验证microRNA芯片结果的可靠性。7计算机软件预测靶基因。结果：1乳腺癌组织AR阳性率较高,达72.5%,尤其在ER阴性PR阴性乳腺癌病例,AR常常显示阳性(占53.2%)。AR表达与ER(P<0.001)和PR(P=0.035)呈正相关,与其它常见指标无关。较多(61.0%)basal-like型乳腺癌AR显示阴性(P<0.001),提示预后欠佳。在五个分子亚型中,除了HER-2过表达型,luminal A、luminal B、basal-like以及normal-like亚型AR阳性组出现局部复发、远处转移或死亡比例较AR阴性组少(P=0.019,0.044,0.034和0.032),生存曲线也显示了AR阳性患者预后较好(P=0.006,P=0.013,P=0.036和P=0.010)。2 DHT作用两种细胞后,AR蛋白表达增多,雄激素通过AR抑制ER阳性的MCF-7和和ER阴性的MDA-MB-453两个乳腺癌细胞系的生长,细胞周期结果显示G1期细胞比例增高,S期细胞比例降低。3筛选出上调大于1.5倍的microRNA hsa-miR-30c,下调大于1.5倍的microRNA hsa-miR-7, hsa-miR-518b,行Realtime RT-PCR证实和nicroRNA芯片的结果基本相符。4预测到hsa-miR-30c靶基因191个,hsa-miR-7靶基因40个,hsa-miR-518b11个。结论：乳腺癌AR的检测有助于改进和细化乳腺癌的分子分型,为指导个体化治疗提供理论依据。AR途径对ER阳性的MCF-7和ER阴性的MDA-MB-453乳腺癌细胞均有抑制生长作用,可能通过抑制细胞由G1期到S期转化来实现的。筛选得到可能与AR影响乳腺癌发生发展作用相关的microRNA有hsa-miR-30c, hsa-miR-7, hsa-miR-518b。