【摘 要】
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目的:构建携带SMO靶向siRNA慢病毒表达载体,并证实其对胰腺癌细胞中SMO基因表达的抑制作用。方法:设计并合成3条SMO基因靶向siRNA片段,利用基因重组技术构建携带此3条片段的
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目的:构建携带SMO靶向siRNA慢病毒表达载体,并证实其对胰腺癌细胞中SMO基因表达的抑制作用。方法:设计并合成3条SMO基因靶向siRNA片段,利用基因重组技术构建携带此3条片段的慢病毒表达载体并测定其滴度,构建好的慢病毒表达载体转染人胰腺癌细胞株SW1990后,采用RT-PCR法检测SMO基因的表达以筛选出效果最佳的干扰表达载体,并以此载体转染SW1990细胞后采用Western blot法检测SMO蛋白表达。结果:基因测序与酶切电泳结果提示成功合成SMO靶向siRNA片段且其正确插入慢病毒表达载体,无碱基缺失错排与突变,测定病毒滴度分别为5.31×108TU/ML,1.49×109TU/ML及8.50×108TU/ML,经转染SW1990细胞后,测定对SMO基因表达的抑制率分别为86.00%,74.85%及19.22%,效果最优的干扰表达载体转染SW1990细胞后对SMO蛋白表达的抑制率>80%。结论:成功构建携带SMO基因靶向siRNA的慢病毒表达载体,且该载体可有效抑制胰腺癌细胞中SMO基因的表达,为进一步的研究提供了良好的实验工具。
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