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目的:检测细胞周期蛋白依赖性激酶-5(cyclin-dependent kinase-5,Cdk5)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞中的表达和对细胞生物学功能的影响,并探讨其对免疫抑制因子PD-L1表达的影响。方法:1利用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantificational real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法和Western blot实验检测Cdk5在5种NSCLC细胞H460、H1299、H520、A549、H1975和正常肺胚胎纤维组织细胞2BS中的表达水平,筛选出Cdk5高表达水平最高的H460、A549细胞和Cdk5低表达的H1299细胞。2利用干扰RNA技术,构建Cdk5稳定低表达的H460细胞株(shCdk5组),并设置空载体组(shNC组)和空白对照组(WT组);利用MTS和平板克隆形成实验检测Cdk5对H460细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测shCdk5对细胞周期和细胞凋亡的影响;细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测shCdk5对H460细胞迁移、侵袭能力的影响。3利用qRT-PCR和Western blot实验检测PD-L1在五种NSCLC细胞中表达水平,并检测shCdk5对PD-L1表达水平的影响。结果:1.在NSCLC中Cdk5呈高表达状态,且Cdk5在H460、A549细胞中表达量最高(P<0.05),在H1299细胞中最低(P<0.05)。2.利用干扰RNA技术结合流式细胞术筛选获得稳定低表达Cdk5的H460细胞系shCdk5H460;MTS实验结果表明,shCdk5组H460细胞的增殖活性明显降低(P<0.05);平板克隆形成实验结果表明,shCdk5组细胞克隆形成能力被显著抑制(P<0.05);细胞周期实验结果表明,shCdk5组细胞G0/G1期比例显著增加(P<0.05);细胞凋亡实验结果显示,shCdk5组细胞处于凋亡状态的细胞数目显著增多(P<0.05);细胞划痕实验结果提示,shCdk5组迁移距离显著降低(P<0.05);Transwell实验显示,shCdk5组穿膜细胞数明显降低(P<0.05)。3.qRT-PCR和Western blot实验发现NSCLC细胞系H1975、H520、A549、H460细胞中PD-L1基因和蛋白的表达水平均高于2BS细胞,其中H460、A549细胞中PD-L1基因和蛋白表达量较高(P<0.05);shCdk5组与shNS、WT组相比,PD-L1的表达水平明显下调(P<0.05)。结论:1.与人正常肺胚胎纤维细胞2BS相比,Cdk5在NSCLC细胞中呈高表达状态,以RNA干扰的方法敲低Cdk5并建立稳定低表达的H460细胞。敲低Cdk5能够抑制NSCLC细胞H460增殖、凋亡、迁移、侵袭等恶性生物学行为。2.PD-L1在非小细胞肺癌中呈高表达状态,敲低Cdk5可以下调NSCLC细胞中PD-L1的表达水平,提示在非小细胞肺癌中Cdk5与PD-L1表达呈正相关,可能影响肿瘤免疫逃逸。