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研究目的:1.人多发性骨髓瘤细胞株中DJ-1 mRNA及蛋白质的表达情况;2.初步探明DJ-1是否对多发性骨髓瘤细胞增殖、细胞周期及凋亡有调节作用;3.初步探明DJ-1是否影响药物(硼替佐米、地塞米松)诱导的骨髓瘤细胞凋亡。研究方法:1.实时荧光定量PCR(realtime quantitative PCR,RT-qPCR)检测骨髓瘤细胞系(human myeloma cell lines,HMCLs)RPMI8226、U266及正常人外周血单个核细胞DJ-1 mRNA水平,免疫印迹杂交(Western Blot,WB)检测DJ-1蛋白表达水平;2.分别用无关序列shRNA病毒液(Control shRNA Lentiviral Particles-A)及靶向下调DJ-1的shRNA病毒液(DJ-1 shRNA Lentiviral Particles)感染RPMI8226、U266细胞,使用含适当浓度的嘌呤霉素持续筛选稳定转染细胞,运用RT-qPCR和WB检测稳定转染细胞中DJ-1的表达情况以验证转染效果;3.慢病毒转染RPMI8226和U266细胞下调DJ-1表达后,采用CCK8比色法、流式细胞术检测细胞增殖、自发凋亡、细胞周期,并与对照组细胞比较;4.转染慢病毒下调RPMI8226、U266细胞DJ-1表达后,给予硼替佐米、地塞米松处理细胞,采用CCK8比色法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况,并与对照组细胞比较。研究结果:1.rt-qpcr及wb检测发现,与正常人外周血单个核细胞相比,多发性骨髓瘤细胞株rpmi8226、u266中dj-1mrna和蛋白均呈高表达状态。2.dj-1shrna慢病毒干扰载体(shdj-1)转染多发性骨髓瘤细胞株rpmi8226、u266,并用含嘌呤霉素的完全培养基持续培养,筛选出稳定转染细胞。经验证,shdj-1转染的骨髓瘤细胞中,dj-1mrna和蛋白质水平明显低于空白对照组及shcontrol组,表明我们成功构建了dj-1下调的骨髓瘤细胞模型。3.转染shdj-1后,除种板48hrpmi8226两组细胞od值无明显差异(p=0.0779),其余各时间点检测发现,与shcontorl对照组相比,细胞增殖减慢(p<0.05);细胞周期中g1期细胞比例减少,s期细胞比例上升,细胞阻滞于s期(p<0.05);细胞早期凋亡率显著升高(p<0.05)。4.分别使用终浓度为0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0nmol/l的硼替佐米,0、0.5、1.0、5.0、10.0、20.0μmol/l的地塞米松处理各组细胞24h,cck8法检测各组细胞od值,并计算细胞增殖抑制率,结果显示,随着药物浓度升高,细胞增殖抑制率逐渐升高。比较同一药物浓度处理下的各组细胞发现,除0.5、1.0μmol/l地塞米松处理u266各组细胞的增殖抑制率差异无统计学意义外,其余各浓度药物处理下,shdj-1组细胞增殖抑制率较shcontrol组细胞显著升高(p<0.05)。5.使用终浓度为2.0nmol/l的硼替佐米、1.0μmol/l的地塞米松处理骨髓瘤细胞株rpmi8226各组细胞48h,流式细胞术检测细胞周期,结果显示,与shControl组相比,shDJ-1组G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高,细胞阻滞于S期(P<0.05)。6.分别用不同浓度的硼替佐米(终浓度为0、2.5、5.0、10.0nmol/L)、地塞米松(终浓度为0、0.1、1.0、10.0μmol/L)处理各组细胞,24h后收集细胞FITC Annexin V/PI染色,采用流式细胞术检测细胞凋亡,结果发现,随着药物浓度增加,细胞早期凋亡率升高;同一浓度药物处理下,除5.0nmol/L硼替佐米、0.1μmol/L地塞米松处理U266细胞差异无统计学意义外(P=0.0505;0.051),其余shDJ-1组细胞凋亡率较shControl组均明显升高(P<0.05),差异具有统计学意义。结论:1.在两种常见的人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226、U266中,DJ-1mRNA及蛋白质呈异常高表达。2.DJ-1参与调节RPMI8226、U266细胞增殖、细胞周期及凋亡,抑制DJ-1增强细胞对硼替佐米和地塞米松的敏感性,但具体作用机制有待进一步研究。3.DJ-1可能是多发性骨髓瘤潜在的治疗靶点,值得进一步研究。