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前言锌是机体必需的微量元素之一,是体内许多金属结合蛋白和细胞发挥正常功能的必要成分。锌离子不能自由穿越细胞膜,其跨膜转运需要特定的锌离子转运蛋白介导,以维持细胞内锌离子的稳态。锌转运体ZnT8属于SLC30家族,克隆自SLC30A8基因(染色体8q24.11),是一段含有369个氨基酸片段的蛋白。在胰岛素合成过程中,存在于胰岛素分泌小泡上的ZnT8使锌离子进入小泡参与锌胰岛素六聚体的形成,进而参与细胞完成胰岛素形成和储存的过程。因为ZnT8在胰岛alpha细胞、甲状腺腺泡上皮细胞、肾上腺皮质细胞等内分泌细胞也有表达,所以ZnT8被认为是一种与内分泌细胞有紧密联系的锌转运体。本研究中,我们探讨了ZnT8在生殖系统的内分泌细胞内的表达,进一步验证ZnT8与内分泌细胞的关系。材料与方法选取健康CD-1成年小鼠30只(雄性和雌性各半,体重20-25克,购自中国医科大学实验动物部),给予充足的食物和自来水。使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)在mRNA水平检测ZnT8在睾丸和卵巢的表达,用1%琼脂糖凝胶电泳分离PCR的产物。运用免疫组织化学染色技术检测ZnT8在睾丸的表达。应用金属自显影(AMG)组织化学染色技术显示游离锌离子在睾丸和卵巢两种组织中的分布。应用免疫荧光染色技术验证ZnT8和StAR蛋白在睾丸Leydig细胞和次级卵泡颗粒细胞的共存。实验结果1、ZnT8 mRNA在睾丸和卵巢表达的RT-PCR结果RT-PCR结果显示在250bp和500bp之间(ZnT8引物的大小为323bp)的位置上出现了清楚的条带,表明ZnT8 mRNA在睾丸和卵巢的表达。2、ZnT8蛋白在睾丸分布与表达的免疫组化结果与阴性对照组比较,ZnT8蛋白主要分布于睾丸曲精小管之间的Leydig细胞,同时,在曲精小管的基底部的精原细胞也有ZnT8蛋白分布。3、锌离子在睾丸分布的AMG结果睾丸的锌离子分布有向曲精小管中心集中的趋势。在曲精小管基底部和曲精小管之间Leydig细胞中,也可以观察到游离锌离子的分布。4、锌离子在卵巢分布的AMG结果卵巢的游离锌离子广泛分布于卵巢黄体、初级卵泡和次级卵泡。在次级卵泡,卵母细胞和卵泡膜内侧的颗粒细胞内有大量锌离子分布。5、睾丸Leydig细胞和卵巢次级卵泡的ZnT8免疫荧光结果在睾丸的Leydig细胞和卵巢次级卵泡的颗粒细胞层上进行ZnT8和StAR的免疫荧光双标检测,结果显示ZnT8和StAR蛋白共存于这两种类固醇激素分泌细胞。结论1、ZnT8 mRNA和蛋白在睾丸和卵巢中均有表达。2、ZnT8在睾丸中的表达存在特异性,主要集中于Leydig细胞。3、ZnT8在睾丸和卵巢中的表达都与StAR蛋白存在位置上的相关性。