NMN和NR对不同类型DNA损伤影响的研究

来源 :杭州师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cph2009
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目的:1.比较烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)和烟酰胺核糖(Nicotinamide riboside,NR)对顺铂或苯并(a)芘诱导DNA损伤的影响。2.比较NMN对顺铂和苯并(a)芘诱导DNA损伤的保护作用;比较NR对顺铂和苯并(a)芘诱导DNA损伤的保护作用。方法:NMN或NR与顺铂,NMN或NR与苯并(a)芘处理HeLa细胞,用台盼蓝染色法检测NMN和NR对DNA损伤剂处理后细胞活力。为了研究NMN和NR对DNA损伤的预防和促进修复作用,分别在DNA损伤剂处理前/后加入NMN和NR培养细胞。HeLa细胞预先用不同浓度(0、0.625、1.25、2.5、5和10 mM)的NMN或NR处理12小时后,再用顺铂或苯并(a)芘进行干预12小时;细胞先用顺铂或苯并(a)芘处理12小时,去除DNA损伤剂后再用NMN和NR干预,分别在保护剂处理0、8、16、24和32小时收集细胞。采用磷酸化H2AX免疫荧光和碱性彗星实验检测DNA损伤水平。最后测定NMN和NR对DNA损伤剂处理细胞中的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)水平和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,探讨NMN和NR在保护DNA损伤的机制。数据以平均值±标准差表示。多组数据比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)和/或双因素方差分析(Two-Way ANOVA)。组间两两比较采用Dunnett-t检验,以Ρ<0.05认为显著性统计学差异。结果:1.在顺铂和苯并(a)芘处理的细胞中,NMN和NR在增加细胞活力、增加细胞内NAD+含量以及降低细胞中ROS水平方面无显著差异。2.在诱导DNA损伤前,NMN处理组DNA损伤水平高于NR处理组。3.在诱导DNA损伤后,同时间点的NMN和NR处理组DNA损伤水平无显著差异。4.NMN和NR预处理可以使顺铂处理组的DNA损伤水平比苯并(a)芘处理组更低。5.相比于顺铂处理组,损伤后添加NMN和NR可以更快减少苯并(a)芘处理组的DNA损伤。结论:1.在诱导DNA损伤前NR对顺铂或苯并(a)芘诱导HeLa细胞中的DNA损伤的保护作用均优于NMN,对诱导DNA损伤后的修复影响无差异。2.NMN和NR均对顺铂诱导的细胞DNA损伤有更强的保护作用,对苯并(a)芘诱导DNA损伤后的修复有更强的促进作用。3.NMN和NR增加细胞中NAD+水平、减少ROS水平可能与其抗DNA损伤功能有关。
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