论文部分内容阅读
目的:观察全脑缺血大鼠认知功能、海马CA1区组织形态学和p-MEK1、p-ERK1/2蛋白表达的变化,探讨IGF-1能否通过调控MEK/ERK信号通路的表达来影响全脑缺血大鼠的空间学习记忆能力,为临床改善认知功能障碍提供依据。方法:(1)采用完全随机方法将Wistar大鼠分为正常组(NC组)、假手术组(SO组)、模型对照组(MC组)、模型+IGF-1组(MC+IGF-1组)、模型+IGF-1+PPP组(MC+IGF-1+PPP组)。(2)除NC组外均给予侧脑室置管,置管6天后,采用改良Pulsinelli四血管阻断法(4-VO)建立全脑缺血大鼠模型。(3)4-VO术后根据分组给予不同的药物干预。NC组不予干预,SO组、MC组、MC+IGF-1组腹腔注射1ml DMSO(PPP溶媒),MC+IGF-1+PPP组腹腔注射PPP1ml(2mg/kg)。30min后,SO组、MC组侧脑室注射生理盐水(NS)10μl,MC+IGF-1组、MC+IGF-1+PPP组侧脑室注射IGF-1 10μl(0.2μg/μl)。每天1次,连续注射7天。(4)侧脑室置管术前及药物干预7天后行Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力。(5)HE染色观察海马CA1区组织形态学改变,免疫组化和Western blot检测海马p-MEK1、p-ERK1/2蛋白表达水平。结果:1)侧脑室置管大鼠100只,置管后大鼠总存活率:87.00%(87/100);四血管阻断法手术大鼠78只,模型成功并存活率为41.03%(32/78)。2)morris水迷宫结果:术前各组大鼠基础游泳速度差别无统计学意义(p>0.05)。药物干预后,mc组、mc+igf-1组、mc+igf-1+ppp组平均逃避潜伏期较nc组延长,差别有统计学意义(p<0.05),mc+igf-1组平均逃避潜伏期较mc组缩短,差别有统计学意义(p<0.05),mc+igf-1+ppp组与mc组平均逃避潜伏期差别无统计学意义(p>0.05),mc+igf-1组平均逃避潜伏期较mc+igf-1+ppp组短,差别有统计学意义(p<0.05);mc组、mc+igf-1组、mc+igf-1+ppp组跨越平台次数较nc组减少,原平台象限游泳时间缩短,差别有统计学意义(p<0.05),mc组较mc+igf-1组跨越平台次数减少,原平台象限游泳时间缩短,差别有统计学意义(p<0.05),mc+igf-1+ppp组与mc组原平台象限游泳时间和跨越平台次数差别无统计学意义(p>0.05),mc+igf-1+ppp组较mc+igf-1组跨越平台次数减少,原平台象限游泳时间缩短,差别有统计学意义(p<0.05)。3)he染色结果:nc组和so组大鼠海马ca1区细胞大而圆,排列较整齐,mc组大鼠海马ca1区细胞有不同程度的变性坏死,表现为数目减少,细胞水肿,排列紊乱,胞质浓染嗜伊红,mc+igf-1组海马ca1区细胞变性坏死程度较mc组轻,mc+igf-1+ppp组海马ca1区细胞变性坏死程度与mc组相当。4)免疫组化结果:药物干预后,mc组、mc+igf-1组、mc+igf-1+ppp组大鼠海马ca1区p-mek1、p-erk1/2阳性细胞表达较nc组减少,差异有统计学意义(p<0.05);mc+igf-1组大鼠海马ca1区p-mek1、p-erk1/2阳性细胞较mc组表达增多,差异有统计学意义(p<0.05);mc+igf-1组大鼠海马ca1区p-mek1、p-erk1/2阳性细胞较MC+IGF-1+PPP组表达增多,差异有统计学意义(P<0.05);MC+IGF-1+PPP组与MC组大鼠海马CA1区p-MEK1、p-ERK1/2阳性细胞表达差异无统计学意义(P>0.05)。5)Western blot结果:药物干预后,MC组、MC+IGF-1组、MC+IGF-1+PPP组大鼠海马p-MEK1、p-ERK1/2与GAPDH蛋白灰度比值均小于NC组,差异有统计学意义(P<0.05);MC+IGF-1组海马p-MEK1、p-ERK1/2与GAPDH蛋白灰度比值大于MC组,差异有统计学意义(P<0.05);MC+IGF-1组海马p-MEK1、p-ERK1/2与GAPDH蛋白灰度比值大于MC+IGF-1+PPP组,差异有统计学意义(P<0.05);MC+IGF-1+PPP组海马p-MEK1、p-ERK1/2与GADPH蛋白灰度比值与MC组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:大鼠海马p-MEK1、p-ERK1/2蛋白表达减少可能是全脑缺血大鼠认知障碍发生的机制之一;IGF-1能够改善全脑缺血大鼠的空间学习记忆能力;IGF-1改善全脑缺血大鼠空间学习记忆能力可能与激活MEK/ERK信号通路,提高海马p-MEK1、p-ERK1/2蛋白的表达有关。